DNA的粗提取与鉴定好实验流程图_精品文档PPT文件格式下载.ppt
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11、鸡血细胞做实验材料,一是因为鸡血细胞核、鸡血细胞做实验材料,一是因为鸡血细胞核、鸡血细胞做实验材料,一是因为鸡血细胞核、鸡血细胞做实验材料,一是因为鸡血细胞核DNADNA含量丰富,材料易得;
二是鸡血细胞极易吸水胀破。
含量丰富,材料易得;
22、DNADNA在不同浓度的在不同浓度的在不同浓度的在不同浓度的NaClNaCl溶液中溶解度不同,溶液中溶解度不同,溶液中溶解度不同,溶液中溶解度不同,33、嫩肉粉的主要成分是木瓜蛋白酶,其作用是分解、嫩肉粉的主要成分是木瓜蛋白酶,其作用是分解、嫩肉粉的主要成分是木瓜蛋白酶,其作用是分解、嫩肉粉的主要成分是木瓜蛋白酶,其作用是分解蛋白质,使提取出的蛋白质,使提取出的蛋白质,使提取出的蛋白质,使提取出的DNADNA纯度较高纯度较高纯度较高纯度较高44、预冷的乙醇溶液具有以下优点:
一是抑制核酸水、预冷的乙醇溶液具有以下优点:
一是抑制核酸水解酶活性,防止解酶活性,防止解酶活性,防止解酶活性,防止DNADNA降解,二是降低分子运动,易于降解,二是降低分子运动,易于降解,二是降低分子运动,易于降解,二是降低分子运动,易于形成沉淀析出,三是低温有利于增加形成沉淀析出,三是低温有利于增加形成沉淀析出,三是低温有利于增加形成沉淀析出,三是低温有利于增加DNADNA分子柔韧性,分子柔韧性,分子柔韧性,分子柔韧性,减少断裂;
减少断裂;
55、洗涤剂等去污剂可以溶解细胞的细胞壁,破坏细、洗涤剂等去污剂可以溶解细胞的细胞壁,破坏细、洗涤剂等去污剂可以溶解细胞的细胞壁,破坏细、洗涤剂等去污剂可以溶解细胞的细胞壁,破坏细胞膜,同时也能使蛋白质变性;
胞膜,同时也能使蛋白质变性;
66、在、在、在、在60756075度条件下加温处理,蛋白质变性,而度条件下加温处理,蛋白质变性,而度条件下加温处理,蛋白质变性,而度条件下加温处理,蛋白质变性,而DNADNA结构不会受到破坏,提取纯度较高的结构不会受到破坏,提取纯度较高的结构不会受到破坏,提取纯度较高的结构不会受到破坏,提取纯度较高的DNADNA77、二苯胺的沸水浴二苯胺的沸水浴二苯胺的沸水浴二苯胺的沸水浴能使能使能使能使DNADNA染成染成染成染成蓝蓝蓝蓝色色色色根据以上原理可设计提取和纯化根据以上原理可设计提取和纯化DNA的方案:
的方案:
方案一:
30mL含含DNA的滤液的滤液2mol/LNaCl同方向搅拌,同方向搅拌,DNA溶解溶解加入蒸加入蒸馏水馏水DNA析出析出过滤得到过滤物过滤得到过滤物放到放到2mol/LNaCl溶液中溶解溶液中溶解DNA-NaCl溶解溶解液液方案二:
方案二:
30mL滤液嫩肉粉(木瓜蛋白滤液嫩肉粉(木瓜蛋白酶)酶)静置静置1015分钟分钟DNA滤液滤液方案三:
方案三:
30mL滤液滤液6075恒温保温恒温保温1015分钟分钟过滤获得过滤获得DNA滤液滤液两种材料的两种材料的DNA粗提取与鉴定过程粗提取与鉴定过程以鸡血为材料以鸡血为材料以花菜为材料以花菜为材料释放组织细胞中的释放组织细胞中的释放组织细胞中的释放组织细胞中的DNADNA,粗提取粗提取粗提取粗提取DNADNA,将粗提取的将粗提取的将粗提取的将粗提取的DNADNA进一步纯化,进一步纯化,进一步纯化,进一步纯化,鉴定提取物是鉴定提取物是鉴定提取物是鉴定提取物是DNADNA鸡血细胞鸡血细胞鸡血细胞鸡血细胞植物组织植物组织植物组织植物组织.0.1g/ml.0.1g/ml的柠檬酸钠溶液的柠檬酸钠溶液的柠檬酸钠溶液的柠檬酸钠溶液,按按按按1:
21:
2的比例与新鲜鸡血混的比例与新鲜鸡血混的比例与新鲜鸡血混的比例与新鲜鸡血混合搅拌均匀。
合搅拌均匀。
.将血液置于冰箱中将血液置于冰箱中将血液置于冰箱中将血液置于冰箱中2424小时小时小时小时,弃上部澄清液弃上部澄清液弃上部澄清液弃上部澄清液.取烧杯中的血细胞液约取烧杯中的血细胞液约取烧杯中的血细胞液约取烧杯中的血细胞液约510ml510ml加入到加入到加入到加入到100ml100ml烧杯中,烧杯中,烧杯中,烧杯中,向烧杯中加入向烧杯中加入向烧杯中加入向烧杯中加入20ml20ml蒸馏水,用玻棒沿一个方向蒸馏水,用玻棒沿一个方向蒸馏水,用玻棒沿一个方向蒸馏水,用玻棒沿一个方向快速快速快速快速搅搅搅搅拌拌拌拌55分钟,加速血细胞在低渗溶液中的破裂分钟,加速血细胞在低渗溶液中的破裂分钟,加速血细胞在低渗溶液中的破裂分钟,加速血细胞在低渗溶液中的破裂.将将将将2mol/L2mol/L的氯化钠溶液的氯化钠溶液的氯化钠溶液的氯化钠溶液50ml50ml缓缓倒入烧杯中,用玻缓缓倒入烧杯中,用玻缓缓倒入烧杯中,用玻缓缓倒入烧杯中,用玻棒沿一个方向搅拌,使棒沿一个方向搅拌,使棒沿一个方向搅拌,使棒沿一个方向搅拌,使DNADNA溶解于氯化钠溶液中,滤溶解于氯化钠溶液中,滤溶解于氯化钠溶液中,滤溶解于氯化钠溶液中,滤除杂质,获得粘稠状的鸡血细胞除杂质,获得粘稠状的鸡血细胞除杂质,获得粘稠状的鸡血细胞除杂质,获得粘稠状的鸡血细胞DNADNA提取液提取液提取液提取液.将鸡血细胞将鸡血细胞将鸡血细胞将鸡血细胞DNADNA提取液置于较大的烧杯中,沿烧杯提取液置于较大的烧杯中,沿烧杯提取液置于较大的烧杯中,沿烧杯提取液置于较大的烧杯中,沿烧杯内壁缓缓倒入蒸馏水,并不断搅拌,直到粘稠状内壁缓缓倒入蒸馏水,并不断搅拌,直到粘稠状内壁缓缓倒入蒸馏水,并不断搅拌,直到粘稠状内壁缓缓倒入蒸馏水,并不断搅拌,直到粘稠状DNADNA不再析出为止。
用玻棒搅拌,使析出的不再析出为止。
用玻棒搅拌,使析出的DNADNA缠绕于玻缠绕于玻缠绕于玻缠绕于玻棒末端。
棒末端。
.将析出的将析出的将析出的将析出的DNADNA再溶解于再溶解于再溶解于再溶解于2mol/L2mol/L的氯化钠溶液中。
的氯化钠溶液中。
.在在在在DNADNA的氯化钠溶液中倒入的氯化钠溶液中倒入的氯化钠溶液中倒入的氯化钠溶液中倒入95%95%的酒精的酒精的酒精的酒精50ml50ml(冷(冷(冷(冷却过的酒精效果较好),使却过的酒精效果较好),使却过的酒精效果较好),使却过的酒精效果较好),使DNADNA再次析出,用玻棒搅再次析出,用玻棒搅再次析出,用玻棒搅再次析出,用玻棒搅拌,使拌,使拌,使拌,使DNADNA再次缠绕于玻棒末端。
再次缠绕于玻棒末端。
.DNA.DNA的鉴定:
取两支试管,各加入的鉴定:
取两支试管,各加入2ml0.0152ml0.015氯化钠氯化钠氯化钠氯化钠溶液,将溶液,将溶液,将溶液,将DNADNA溶解于其中一支试管中,另一支做为对溶解于其中一支试管中,另一支做为对溶解于其中一支试管中,另一支做为对溶解于其中一支试管中,另一支做为对照组。
然后,在两支试管内加等量的二苯胺试剂,水照组。
然后,在两支试管内加等量的二苯胺试剂,水浴加热浴加热浴加热浴加热10min10min左右,冷却,观察实验现象。
左右,冷却,观察实验现象。
.取新鲜植物组织(菜花)取新鲜植物组织(菜花)取新鲜植物组织(菜花)取新鲜植物组织(菜花)放置于冰箱中冷却放置于冰箱中冷却放置于冰箱中冷却放置于冰箱中冷却1212天天天天.取取取取3030克植物组织克植物组织克植物组织克植物组织,切碎切碎切碎切碎,置于研体中置于研体中置于研体中置于研体中,倒入适量洗洁倒入适量洗洁倒入适量洗洁倒入适量洗洁精精精精,加入适量的加入适量的加入适量的加入适量的NaCl,NaCl,充分充分充分充分研磨研磨研磨研磨1010分钟分钟分钟分钟.过滤研磨液,取上清夜过滤研磨液,取上清夜过滤研磨液,取上清夜过滤研磨液,取上清夜置于冰箱中冷却几分钟置于冰箱中冷却几分钟置于冰箱中冷却几分钟置于冰箱中冷却几分钟.取取取取11倍体积的上清液,倍体积的上清液,倍体积的上清液,倍体积的上清液,加入加入加入加入22倍体积的倍体积的倍体积的倍体积的95%95%的冷酒的冷酒的冷酒的冷酒精当中,用玻棒轻轻搅拌,精当中,用玻棒轻轻搅拌,精当中,用玻棒轻轻搅拌,精当中,用玻棒轻轻搅拌,沉淀沉淀沉淀沉淀3535分钟后可见白色絮分钟后可见白色絮分钟后可见白色絮分钟后可见白色絮状状状状DNADNA缠绕于玻棒末端。
缠绕于玻棒末端。
.DNA.DNA的提纯同鸡血细胞的提纯同鸡血细胞的提纯同鸡血细胞的提纯同鸡血细胞为实验材料的实验操作步为实验材料的实验操作步为实验材料的实验操作步为实验材料的实验操作步骤骤骤骤66、77,具体数据有一定,具体数据有一定,具体数据有一定,具体数据有一定的差异。
的差异。
.鉴定鉴定鉴定鉴定鸡血细胞液中鸡血细胞液中鸡血细胞液中鸡血细胞液中DNADNA的粗提取实验流程图的粗提取实验流程图的粗提取实验流程图的粗提取实验流程图2mol/L2mol/L鸡血细胞液中鸡血细胞液中鸡血细胞液中鸡血细胞液中DNADNA的粗提取实验流程图的粗提取实验流程图的粗提取实验流程图的粗提取实验流程图55、过滤、过滤、过滤、过滤取纱布上的滤物取纱布上的滤物取纱布上的滤物取纱布上的滤物纱布过滤纱布过滤纱布过滤纱布过滤66、再次溶解、再次溶解、再次溶解、再次溶解DNADNA2mol/LNaCl2mol/LNaCl溶液溶液溶液溶液取滤物取滤物取滤物取滤物鸡血细胞液中鸡血细胞液中鸡血细胞液中鸡血细胞液中DNADNA的粗提取实验流程图的粗提取实验流程图的粗提取实验流程图的粗提取实验流程图77、加冷酒精使、加冷酒精使、加冷酒精使、加冷酒精使DNADNA析出(纯化)析出(纯化)析出(纯化)析出(纯化)冷酒精冷酒精冷酒精冷酒精鸡血细胞液中鸡血细胞液中鸡血细胞液中鸡血细胞液中DNADNA的粗提取实验流程图的粗提取实验流程图的粗提取实验流程图的粗提取实验流程图DNA的鉴定DNA的的粗粗提提取取与与鉴鉴定定实验原理实验原理DNA在不同浓度在不同浓度NaCl溶液中溶解度不同溶液中溶解度不同DNA与其他细胞成分在酒精中溶解度不同与其他细胞成分在酒精中溶解度不同DNA和蛋白质对酶、高温和洗涤剂耐受性不同和蛋白质对酶、高温和洗涤剂耐受性不同DNA与二苯胺呈现蓝色反应与二苯胺呈现蓝色反应DNA粗提取粗提取选择适宜材料选择适宜材料破碎细胞破碎细胞DNA的溶解和析出的溶解和析出DNA的纯化的纯化鉴定鉴定DNA与二苯胺混合,沸水浴,呈现蓝色反应与二苯胺混合,沸水浴,呈现蓝色反应总结:
总结:
1.下列关于下列关于DNA粗提取与鉴定的说法正确的是粗提取与鉴定的说法正确的是A氯化钠的浓度越低,对氯化钠的浓度越低,对DNA的溶解度越大的溶解度越大B人血也可代替鸡血进行实验人血也可代替鸡血进行实验C柠檬酸钠的主要作用是加速血细胞破裂柠檬酸钠的主要作用是加速血细胞破裂DDNA不能溶于酒精不能溶于酒精2.在破碎鸡血细胞时,要先加入在破碎鸡血细胞时,要先加入20ml的蒸馏水,其作用是的蒸馏水,其作用是A.DNA溶解于水溶解于水B血细胞破裂
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