标准曲线的制作.pptx
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紫外可见分光光度法,分光光度法中标准曲线的定量依据标准曲线的制作过程标准曲线制作时的注意事项用EXCELL绘制标准曲线竞赛评分标准分享,朗伯比尔定律,数学表达式:
A=lg(1/T)=Kbc物理意义:
当一束平行单色光垂直通过某一均匀非散射的吸光物质时,其吸光度A与吸光物质的浓度c及吸收层厚度b成正比.,分光光度法中标准曲线的定量依据,分光光度法中标准曲线的定量依据,朗伯比尔定律朗伯-比耳定律成立的前提:
入射光为平行单色光且垂直照射.吸光物质为均匀非散射体系.吸光质点之间无相互作用.辐射与物质之间的作用仅限于光吸收,无荧光和光化学现象发生,标准曲线的制作过程,1.系列标准溶液的配制:
配制待测物质(用分析纯或光谱纯)的标准溶液,并稀释成不同的倍数,使之成为一系列已知准确浓度的标准溶液(一般57份),并且浓度应在分光光度计的测定范围之内。
标准曲线的制作过程2.标准溶液吸光度的测定:
在待测物最大吸收波长下依次测定标准溶液的吸光度。
标准曲线的制作过程,从浓度由低到高依次测定,测试过程不必用水润洗,只需用待测溶液同化。
同化过程为防止溶液流下来不易擦拭,每次倒去溶液后应将吸收池倒扣在滤纸上吸去溶液。
标准曲线的制作过程,用滤纸吸干池外液滴,再用镜头纸轻轻擦拭后放入比色管架进行测定,记录每一标准系列溶液相应的吸光度值,计算出标准曲线方程。
标准曲线的制作过程,思考题:
标准曲线线性好准确度就一定高吗?
标准曲线线性好,只能说明制作者的精密度比较高,并不能代表测试时准确度也高。
如何验证曲线的准确度呢?
配制已知准确浓度的标样,采用与制作标准曲线时相同的测定方法测定其吸光度,然后计算其浓度,与标准值相比较。
标准曲线的制作过程3.如何配制比赛中的待测试样,使其浓度正好处于标准曲线的中心?
以2016年技能竞赛磷含量的测定曲线为例:
中心点的浓度为80g=0.08mg10mLCmgmL=0.08mgCmgmL=0.008如果我们用比赛时配制的磷标准溶液0.5mgmL来配制500mL,那么移取的磷标准溶液VmL=500mL0.008mgmL0.5mgmL=8mL,标准曲线制作时的注意事项,仪器预热至少30分钟。
比色液制备添加试剂数量与顺序正确;比色溶液稀释至刻线。
吸收池操作进行配对测定;手必须拿吸收池毛面;,标准曲线制作时的注意事项,比色液倒入吸收池体积的2/33/4;用滤纸吸干池外液滴,再用擦镜纸擦干;吸收池内应无气泡;吸收池放在吸收池架中应垂直;,标准曲线制作时的注意事项,调换溶液时应用蒸馏水洗三次再用被测溶液洗三次,每次洗涤用量在吸收池体积的1/31/4(若从稀浓度测到高浓度时,可直接用被测溶液洗吸收池);吸收池清洗不能用腐蚀吸收池的洗涤液;每测一个试样,应进行参比校正。
标准曲线制作时的注意事项,4.测定吸光度待仪器稳定后进行测量;从低浓度测量到高浓度;测量时溶液不能滴到仪器上;测定的吸光度读数范围应在0.20.8范围之间;,标准曲线制作时的注意事项,5.结束工作仪器关闭正确;吸收池清洗干净后倒放在滤纸上;玻璃仪器清洗;仪器记录登记;废液按规定要求处理;桌面清洁,物间摆放整齐。
用EXCELL绘制标准曲线,1.输入数据,用EXCELL绘制标准曲线,2.选择数据组,1.鼠标圈定用作X和Y轴的数据,用EXCELL绘制标准曲线,3.选择图形类型,1.点击图表向导,2.选择散点图,3.点击下一步,用EXCELL绘制标准曲线,4.插入图表,点击下一步,用EXCELL绘制标准曲线,书写标题等,用EXCELL绘制标准曲线,作为新工作表插入,用EXCELL绘制标准曲线,选择数据点,按右键添加趋势线,用EXCELL绘制标准曲线,类型中选择线性,选项中将后三项勾起,用EXCELL绘制标准曲线,得到图表后,点击右键,选择“绘图区格式”“清除”等选项,可对图形底色、线条颜色、数据点的大小、网格线进行修改,
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