从环境中分离酵母菌实验设计案.docx
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从环境中分离酵母菌实验设计案
实验设计方案
从环境中分离酵母菌
班级:
10级生科
(2)班
组员:
刘楠楠:
2
潘婷:
2
李炜昊:
2
马森:
2
实验:
从环境中分离出酵母菌
实验设计方案
一、采样
采样的理由:
1、酵母菌与人类的关系密切
酵母菌是一类单细胞真菌的俗称,分类学上分属于子囊菌纲半知菌类
特征:
1. 个体一般以单细胞状态存在;
2. 多数营出芽生殖,有的裂殖;
3. 能发酵糖类产能;
4. 细胞壁常含有甘露聚糖;
5. 喜在含糖量较高、酸度较大的水生环境中生长。
酵母菌分布:
主要生长在偏酸的含糖环境中,在水果、蜜饯的表面和果园土壤中最为常见。
种类:
据1982年的资料,已知的酵母有56属,500多种。
酵母菌与人类的关系极其密切。
千百年来,人类几乎天天离不开酵母菌,例如酒类的生产,面包的制作,乙醇和甘油发酵,石油及油品的脱蜡,饲用、药用等的生产。
2、酵母菌细胞的形态和构造
电子显微镜下的酿酒酵母细胞结构示意图
细胞直径比细菌粗10倍左右,如Saccharomycescerevisiae细胞的宽度为2.5~10μm,长度为4.5~21μm。
因此在光学显微镜下可以模糊地看到它们细胞内的各种结构分化。
酵母菌细胞的形态通常有球状、卵圆状、椭圆状、柱状或香肠状等多种。
细胞壁:
酵母细胞壁呈“三明治”结构
外层:
甘露聚糖(约占30%,以α-糖苷键联结(并非所有酵母菌都有)
内层:
葡聚糖(约占30-40%,由D-葡萄糖以β-糖苷键联结)
中间层:
蛋白质(含6-8%,多为酶类)
细胞膜:
酵母菌的细胞膜与原核生物的基本相同。
但有的酵母菌如酿酒酵母中含有固醇类(甾醇)、VitD的前体----麦角固醇,这在原核生物是罕见的。
细胞核:
核膜:
核孔40~70nm,透性比任何生物膜都大。
•染色体:
由DNA和组蛋白牢固结合而成,呈线状,数目因种而异。
•核仁:
核内有一或几个区域rRNA含量很高,这一区域为核仁,是合成核糖体的场所。
•中心体:
在核膜外,由蛋白质亚基组成的细丝状结构,在细胞繁殖分裂中起作用。
细胞核的功能:
携带遗传信息,控制细胞的增殖和代谢。
3、酵母菌的繁殖方式
4.酵母菌的菌落
大而厚,圆形,光滑湿润,粘性,颜色单调。
常见白色、土黄色、红色。
采样的方法:
原理:
大多数酵母菌为腐生,其生活最适pH为4.5一6,常见于含糖分较高的环境中,例如果园土、菜地土及果皮等植物表面。
故可以从甘蔗、成熟葡萄或苹果等果皮上取样。
利用酵母菌喜欢酸性环境的特点,常用酸性液体培养基获得酵母菌的培养液(这样做的好处是酸性培养条件则可抑制细菌的生长)
实验材料和用具
1、苹果果皮、0.1%美蓝染液、1ml的无菌吸管、无菌培养皿等。
2、豆芽汁葡萄糖培养基
原料:
黄豆芽(100克)、葡萄糖(50克)、蒸馏水(1000ml),自然PH
配制方法:
陈新鲜豆芽100克,放入烧杯中,加水1000ml,煮沸约30min,用纱布过滤,用水补足原量,再加入葡萄糖50克,煮沸融化,121℃灭菌20min.
实验步骤
l、接种:
取一小块果皮,不需冲洗,直接接入到豆芽汁葡萄糖培养液试管中,置28一30℃,培养24小时,可见培养液变混浊。
2、培养,用无菌吸管取上述培养后培养液0.lml,注入另一管乳酸马铃薯葡萄糖培养液中,置28一30℃再培养24小时或稍长(过长则霉菌长出)。
3、观察:
用无菌操作法取少许菌液置于载玻片中央的0.l%美蓝染色液中,混匀后加盖玻片制成水浸片,先用低倍镜后换高倍镜观察酵母菌的形态和出芽生殖情况。
4、活酵母菌可使美蓝还原,从而使菌体不着色,用此方法可判断酵母菌的死活。
芽殖过程:
•母细胞形成小突起(A—D)
•核裂(E—G)
•原生质分配(H—I)
•新膜形成(J—K)
•形成新细胞壁(L)
二、分离
原理:
马铃薯葡萄糖琼脂培养基溶化后制成平板。
用划线法分离酵母菌培养液,从而得到单个菌落。
挑取单个菌落反复再次划线分离纯化,最终可获得纯培养。
培养基的设计:
马铃薯葡萄糖琼脂培养基:
原料:
马铃薯(200克)、葡萄糖(20克)、琼脂(15-20克)、蒸馏水(1000ml),自然PH
配制方法:
将马铃薯去皮后,切片,加水煮烂(煮沸20—30分钟,能被玻璃棒戳破即可),用4层纱布过滤,再加入糖和琼脂,加热融化后再补足水分至1000ml,并在121摄氏度条件下高压灭菌20分种。
方法:
平板划线法
三、鉴定
原理:
大多数酵母菌的菌落特征与细菌相似,但比细菌菌落大而厚,菌落表面光滑、湿润、粘稠,容易挑起,菌落质地均匀,正反面和边缘、中央部位的颜色都很均一,菌落多为乳白色,少数为红色,个别为黑色。
啤酒酵母的菌落红酵母的菌落各种酵母菌的菌落。
方法:
制玻片并在显微镜下观察其形态
四、实验的过程记录及其结果、结果分析
日期
2012/5/27
2012/5/28
2012/5/30
2012/5/31
2012/6/1
记录
配制豆芽汁葡萄糖培养液,并接种,用的材料是成熟的苹果皮。
在28℃的环境下培养了24小时,观察现象,培养液变浑浊。
配制豆芽汁培养基,进一步进行培养。
1.取菌液制片并滴加少许的美蓝染液,用显微镜观察,酵母菌大部分为活的,且处于母细胞形成小突起阶段。
2.配制马铃薯葡萄糖琼脂培养基,用划线法分离酵母菌
1.观察培养基上的菌落,菌落表面光滑、湿润,容易挑起,菌落的质地很均匀,为乳白色。
初步断定分离纯化出来的是酵母菌。
2.镜检,在显微镜下观察大部分酵母菌处于核裂阶段,少数处于新膜形成阶段。
可断定为酵母菌
五、结果及结果分析:
在本实验中,我们的最根本目的是从环境中分离出酵母菌,依据酵母菌的特性,我们选择从成熟的苹果皮中提取,依据酵母菌的形态、菌落特征我们进行了鉴定,最终在经过六天的实验后从环境中提取出了酵母菌,但在实验的过程中所提取出来的酵母菌的量不多,分析原因大概有如下两点:
1.苹果皮在接种前洗过,把一些菌洗掉了。
2.接种时,接种的量不足,导致后续的培养出来的量也不足。
六、实验感想:
此次实验是由四人的一个小组合作完成,在这个过程中,我们既有明确分工,又有合理的合作,同时,我们对自己设计的实验方案不断进行改进,通过这次的实验我们对微生物的实验过程有了更深刻的了解,我们每个人都会进行一次以上的实际操作,在这个过程中,我们对微生物实验的无菌操作及灭菌方法的也有了较好的掌握。
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- 关 键 词:
- 环境 分离 酵母菌 实验设计