岛津SPD高效液相色谱仪确认方案.docx
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岛津SPD高效液相色谱仪确认方案
6.2.3.运行确认3
1.概述
岛津SPD-15C高效液相色谱仪为质量检测中心常用仪器,为确认该仪器各项性能仍符合要求,制订本方案对该仪器进行确认。
1.1.仪器概况
本台岛津SPD-15C高效液相色谱仪是由输液系统、自动进样器、色谱柱(柱温箱)、检测器和数据处理装置等部分组成,液相色谱仪利用样品中各组分在色谱柱内固定相和流动相间分配或吸附特性的差异,由流动相将样品带入色谱柱中进行分离,经检测器检测,依据组分的保留时间和响应值(峰面积或峰高)进行定性和定量的分析。
仪器主要参数如下:
仪器安装位置
质量检测中心
检测器:
型号/设备编号
SPD-15C/03Z130
生产厂家/出厂编号
岛津/L20524931151
光源
氘灯
量程
0.0001~2.56AUFS
波长范围
190~600nm
体积(mm)
260(W)×140(H)×430(D)
输液泵:
型号/设备编号
LC-15C/03Z131
生产厂家/出厂编号
岛津/L20514932222
型号/设备编号
LC-15C/03Z132
生产厂家/出厂编号
岛津/L20514932205
类型
双柱塞往复泵
体积(mm)
260(W)×140(H)×420(D)
压力设定范围
1.0~39.2MPa
流速范围
0.001~9.999mL/min
进样器:
型号/设备编号
SIL-20AC/03Z133
生产厂家/出厂编号
岛津/L20174805350
进样体积范围
0.1~100μL
体积(mm)
260(W)×415(H)×500(D)
柱温箱:
型号/设备编号
DT-230A
生产厂家/出厂编号
YUDIAN
工作站:
工作站
N2000色谱工作站
生产厂家
浙江大学智达自动化信息工程有限公司
1.2.仪器用途
该仪器用于样品含量、有关物质、聚合物等的检测。
2.目的
对该仪器进行安装确认、运行确认及性能确认,以确定仪器是否仍具有良好的检测性能,是否仍能满足日常分析测试工作的需要。
3.范围
适用于岛津高效液相色谱仪SPD-15C的确认。
4.验证小组成员及职责
人员
部门
职责
项目负责人
质量检测中心
负责确认方案的起草
负责按确认方案的要求参与并组织实施确认
负责收集确认记录,对确认结果进行分析,起草确认报告
负责对参与确认的检验人员进行确认方案及操作规程培训
组员
质量检测中心
按确认方案,参与确认实验的操作
质量保证部
负责监督确认实施的进展情况
5.方案执行
所有的空白记录都要被填写,如果项目不适用,用单线划掉,签名并注明日期。
所有的测试项目都应完成,若未完成应记录,按偏差处理,并说明相关原因和解决的措施。
所有的偏差均要求记录,并用适当的方法评估其影响,并证明采取的纠正措施是可以被接受的。
偏差记录见确认记录中“6.偏差处理记录”。
6.内容
6.1.文件检查
6.1.1.目的
确保与本次确认的相关文件都齐全。
6.1.2.程序
6.1.2.1.确定仪器使用说明书等相关原始资料和技术文件齐全。
6.1.2.2.相关人员接受了确认方案及相关操作规程的培训。
6.1.2.3.确认方案中涉及的所有仪器均经过校准,并在有效期内,且有必需的相关证书。
6.1.3.可接受标准
根据确认记录中“1.文件检查记录”的要求,核对相关文件,确保文件完整。
相关人员接受了确认方案及相关操作规程的培训。
确保岛津SPD-15C高效液相色谱仪及其他仪器经过校准,在有效期内,且有相应的证书。
6.1.4.原始记录
检查记录见确认记录“1.文件检查记录”及“2.仪器与试剂”。
6.2.具体确认步骤
6.2.1.仪器与试剂
6.2.1.1.要求
秒表:
分度值不大于0.1s;
分析天平:
最大称量不小于100g,最小分度不大于1mg;
温度计:
温度范围0~100℃、最小分度值不大于0.1℃;
甲醇:
HPLC用;
丙酮:
分折纯;
紫外吸收标准溶液:
取120℃干燥至恒重的基准重铬酸钾约60mg,精密称定,用0.005mol/l硫酸溶液溶解并稀释至1000ml,摇匀,即得重铬酸钾的硫酸溶液;
1×10-7g/mL的萘/甲醇标准溶液;
1×10-4g/mL的萘/甲醇标准溶液。
6.2.1.2.具体见确认记录“2.仪器与试剂”。
6.2.2.安装确认
6.2.2.1.目的
由于在初始安装岛津SPD-15C高效液相色谱仪时,未进行系统的安装确认,故在本次确认中,重新对零配件和仪器的安装条件进行确认,保证各项检查项目结果合格,仪器的安装正确,且能正常运行。
6.2.2.2.程序
对照使用说明书,确认环境、电源等是否符合要求,具体确认步骤按“3.安装确认记录”进行。
6.2.2.3.可接受标准
实验室电源设计安装合理,环境良好,符合仪器安装要求。
环境、电源等符合仪器要求。
6.2.2.4.原始记录
运行确认结果见确认记录中“3.安装确认记录”。
6.2.3.运行确认
6.2.3.1.目的
确认岛津SPD-15C高效液相色谱仪的各项功能是否达到设计要求,并能顺利运行。
6.2.3.2.程序
6.2.3.2.1.运行确认开始前状态的确认
安装确认成功完成;设备与电源连接正常。
6.2.3.2.2.操作功能键确认
按“4.1操作功能键确认”,确认仪器的主要操作功能键及其功能是否正常。
6.2.3.2.3.基本运行功能确认
按“4.2基本运行功能确认”,确认仪器的基本运行功能是否正常。
6.2.3.2.4.输液系统的确认
6.2.3.2.4.1.泵耐压的确认
将仪器各部分连接好,以100%甲醇为流动相,流量为1mL/min,按说明书启动仪器,压力平稳后保持10min,用滤纸检查各管路接口处应无湿迹。
卸下色谱柱,堵住泵出口端(压力传感器以下),使压力达到最大允许值39.2MPa的90%,保持5min无泄漏。
6.2.3.2.4.2.泵流量设定值误差SS、流量稳定性误差SR的确认。
按表1的要求设定流量,启动仪器,压力稳定后,在流动相出口处用事先清洗称重过的容量瓶收集流动相,同时用秒表计时,收集表1规定时间流出的流动相,在分析天平上称重,按式
(1)、式
(2)计算SS和SR。
SS=(m-S)/S×100%
(1)
SR=(max-min)/m×100%
(2)
式中:
m——m=(W2-W1)/(ρt.t),流量实测值,mL/min;
W2——容量瓶+流动相的质量,g;
W1——容量瓶的质量,g;
ρt——试验温度下流动相的密度,g/mL;
t——收集流动相的时间,min;
m——同一组测量的算术平均值,mL/min;
S——流量设定值,mL/min;
max——同一组测量中流量最大值,mL/min;
min——同一组测量中流量最小值,mL/min。
表1
流量设定值/(mL/min)
0.5
1.0
2.0
测量次数
3
3
3
流动相收集时间/min
10
5
5
6.2.3.2.4.3.梯度误差
由梯度控制装置设置阶梯式的梯度洗脱程序,A溶剂为纯水,B溶剂为含0.1%丙酮的水溶液,B经由5个阶梯从0变到100%,如图1所示。
将输液泵和检测器连接(不接色谱柱),开机以后以A溶剂冲洗系统,基线平稳后开始执行梯度程序,画出梯度变化曲线。
求出A,B溶剂不同比例时的输出信号值,重复测量2次,计算平均值。
从B溶剂的含量及对应的输出信号值,按式(3)计算梯度误差Gci,取Gci最大者作为仪器梯度误差。
Gci=(i-m)/m×100%(3)
式中:
Gci——第i阶段梯度误差(%);
i——第i阶段输出信号值增量的平均值;i=i-(i-1)(i=0,1,2,3,4,5);
m——各段输出信号值增量平均值的平均值;m=。
图1
6.2.3.2.5.柱箱温度设定值误差ΔTS和控温稳定性TC的确认
将数字温度计探头固定在柱温箱内,选择35℃和45℃进行确认。
按仪器说明书操作,通电升温,待温度稳定后,记下温度计读数并开始计时,以后每隔10min记录一次读数,共计7次,求出平均值。
平均值与设定值之差为ΔTS,7次读数中最大值与最小值之差为控温稳定性TC。
6.2.3.2.6.紫外-可见光检测器的确认
6.2.3.2.6.1.波长示值误差和重复性
用一节空管代替色谱柱将液路连通,以水为流动相流量为1.0mL/min,采用步进进样方法,在235nm、257nm、313nm和350nm波长处检定仪器的波长示值误差。
从检测器波长较规定波长低5nm处开始到较规定波长高5nm处(例如确认257nm时,从252nm开始到262nm),从低于5nm开始,注入紫外吸收标准溶液10μL,待色谱峰出来完毕后再将检测器波长调高1nm,再注入紫外吸收标准溶液10μL,这样将得到一组不同波长的色谱峰,最高(或最低)色谱峰对应的波长与标准溶液波长之差,即为波长示值误差,示意图如图2;每个波长重复测量三次,其中最大值与最小值之差为波长重复性误差。
图2
6.2.3.2.6.2.基线噪声和基线漂移的确认
)hd选用C18色谱柱,以100%甲醇为流动相,流速为1mL/min,紫外检测器的波长选在254nm检测器灵敏度调到最灵敏档,开机预热,待仪器稳定后(约60min)记录基线60min,从30min内基线上读出噪音值(峰对峰的最大宽度),用工作站色谱图显示的物理量(mv)作单位表示;从60min基线上读出基线漂移值(坐标轴放大后读取),基线漂移用1h内基线偏离原点的值(mv/h)表示。
6.2.3.2.6.3.最小检测浓度的确认
在6.2.3.2.6.2.的色谱条件下,注入10μL或20μL1×10-7g/mL的萘/甲醇标准溶液,记录色谱图,按式(4)计算最小检测浓度cL。
cL=(4)
式中:
cL——最小检测浓度,g/mL;
Nd——检测器基线噪声峰高,mv;
c——标准溶液浓度,g/mL;
H——标准溶液的色谱峰高,mv;
V——进样体积,μL。
6.2.3.2.7.自动进样器进样量准确度误差的确认
取1.5ml进样瓶装入1ml水,用天平精密称定其重量,然后置于自动进样器上让其进样10次,每次10μl。
进样完成后再精密称定其重量,按式(5)由重量差计算进样量准确度。
进样准确度=×100%(5)
式中:
Ma——进样前进样瓶重(mg);
Mb——进样后进样瓶重(mg);
V——进样体积,μL;
ρt——试验温度下(自动进样器设置温度)流动相的密度,mg/μL。
.—0
6.2.3.3.原始记录
运行确认结果见确认记录中“4.运行确认记录”。
6.2.3.4.可接受标准
6.2.3.4.1.仪器的主要功能键及其功能正常,仪器的基本运行功能正常。
6.2.3.4.2.泵耐压的确认:
输液管路接口紧密牢固,在5min内无泄漏。
6.2.3.4.3.泵流量设定值误差SS、流量稳定性误差SR:
流量为0.5mL/min时SS≤5%,SR≤3%;流量为1.0mL/min时SS≤3%,SR≤2%;流量为2.0mL/min时SS≤2%,SR≤2%。
6.2.3.4.4.梯度误差GC:
GC不超过±3%。
6.2.3.4.5.柱箱温度设定值误差ΔTS和控温稳定性TC:
ΔTS不超过±2℃;TC不超过1℃。
6.2.3.4.6.波长示值误差和重复性:
波长示值误差不超过±2nm;波长重复性优于2n
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