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狭义上则专指其中数量最大、种类最多,具有典型的代表性的细菌。
细菌(bacterium)属于原核细胞型微生物
第一章细菌的形态与结构
1.细菌的大小与形态
测量细菌以微米(um)为单位,病毒以纳米(nm)为单位。
球菌(coccus):
直径约1um,外观呈圆球形或近似球形;
不同的球菌细胞排列方式不同,有不同的名称。
如葡萄球菌、双球菌、链球菌、四联球菌、八叠球菌等。
杆菌(bacillus):
长短粗细很不一致,直径约1um,中等长2~3um。
有链杆菌、棒状杆菌、球杆菌、分支杆菌、双歧杆菌等。
螺形菌(spiralbacteria):
菌体弯曲,一个弯曲为弧菌,数个弯曲为螺菌,菌体细长弯曲呈弧形或螺旋形为螺杆菌。
大多细菌以生物被膜的形式存在。
细菌形态可受各种理化因素的影响:
典型型:
在生长条件适宜时培养8~18小时的细菌形态;
衰退型(Involutionform):
细菌衰老时或在陈旧培养物中,或环境中有不适合于细菌生长的物质(如药物、抗生素、抗体、过高的盐分等)时,细菌常常出现不规则的形态,表现为多形性,或呈梨形、气球状、丝状等,称为衰退型。
观察细菌形态和大小特征时,应注意来自机体或环境中各种因素所导致的细菌形态变化。
2.细菌的结构
基本结构:
细胞壁-cellwall细胞膜-cellmembrane细胞质-cytoplasm核质-nuclearmaterial
用革兰染色法将细菌分为:
革兰阳性(G+)菌和革兰阴性(G-)菌。
I.细胞壁共同组分:
肽聚糖(又称粘肽、胞壁质)
聚糖骨架
肽聚糖peptidoglycan四肽侧链
革兰阳性菌五肽交联桥
磷壁酸techoicacid
肽聚糖peptidoglycan四肽侧链
革兰阴性菌核心多糖
脂多糖lipopolysaccharide,LPS脂质A
外膜脂质双层(外膜蛋白)特异多糖
脂蛋白
肽聚糖的作用及意义:
凡能破坏肽聚糖结构或抑制其合成的物质一般都能损害细菌的细胞壁而导致细菌死亡,如溶菌酶、青霉素等。
立体构型使细胞壁坚固,是维持细菌形态的基础成分;
②是青霉素作用的靶分子;
③有致病作用。
革兰阳性细菌细胞壁特有成分:
磷壁酸(Teichoicacid)。
分为膜(脂)磷壁酸和壁磷壁酸;
膜磷壁酸和壁磷壁酸共同组成带负电荷的网状多聚物或基质,使得G+菌的细胞壁具有良好的坚韧性、通透性及静电性能。
作用及意义:
①具有抗原性及黏附素活性;
②具有致病性,以脂磷壁酸(LTA)为主。
革兰阴性细菌细胞壁特有成分:
外膜。
由脂蛋白、脂质双层和脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)组成。
脂多糖是革兰阴性细菌重要致病物质,称内毒素。
脂多糖由脂质A(lipidA)、核心多糖、特异多糖(寡糖重复单位)组成,其中脂质A是主要毒性部分,无种属特性;
核心多糖有属特异性;
特异多糖即革兰阴性菌的菌体抗原(O抗原),有种特异性,是革兰阴性细菌分类的物质基础。
外膜蛋白:
与致病性和耐药性有关。
细胞壁的功能及相关的医学意义:
1、维持细菌形态,承受细胞内高渗透压;
2、参与菌体内外的物质交换;
3、带有多种抗原表位,可以诱发机体的免疫应答;
4、细胞壁的某些成分与细菌致病性、耐药性、静电性有关。
细菌细胞壁缺陷型(细菌L型)bacterialLform:
由于肽聚糖受抑制或破坏而失去细胞壁的在高渗环境下仍可存活的细菌。
原生质体protoplast:
革兰阳性菌L型;
原生质球spheroplast:
革兰阴性菌L型。
细菌L型因细胞壁缺失形态呈高度多形性,大小不一。
细菌L型的意义:
①在高渗环境中仍能生存,具有致病性,常引起慢性感染,如尿路感染、骨髓炎、心内膜炎等;
②由于形态结构和特性发生变异,给临床诊断和治疗造成困难。
临床上遇有症状明显而标本常规细菌培养阴性者,应考虑细菌L型感染(或病毒、衣原体、立克次体等)感染的可能。
G+菌对青霉素敏感,结核杆菌除外;
G-菌对青霉素不敏感,脑膜炎球菌、淋球菌除外。
II.细胞膜cellmembrane功能:
物质转运;
呼吸和分泌;
生物合成;
参与细菌分裂。
中介体mesosome:
细胞膜内陷、折叠形成的囊状膜性结构,多见于G+菌;
中介体类似真核细胞线粒体,又称为拟线粒体。
III.细胞质cytoplasm
核糖体(ribosome):
沉降系数为70S,由50S和30S两个亚基组成。
核糖体是某些抗生素的作用靶位,可抑制细菌蛋白质的合成。
如:
链霉素30S;
红霉素50S
质粒(plasmid):
是存在于细菌胞质中的闭合环状双链DNA,为染色体外的遗传物质。
质粒带有遗传信息,控制细菌某些特定的遗传性状。
如编码菌毛、细菌素、毒素和耐药性。
胞质颗粒(cytoplasmicgranule):
又称为内含物(inclusion),大多为储存营养的物质,包括淀粉、糖原、等多糖、脂类、磷酸盐等。
主要成分是RNA和多偏磷酸的颗粒,噬碱性强,用亚甲蓝染色时着色较深呈紫色,称为纡回体或异染颗粒。
IV.核质nuclearmaterial细菌的遗传物质称为核质或拟核,集中于细胞质的某一区域,多在菌体中央,无核膜、核仁。
特殊结构:
荚膜、鞭毛、菌毛、芽孢等。
荚膜capsule细菌细胞壁外包围的一层由疏水性多糖或蛋白质多聚体组成的粘液性物质结构。
大多数多糖,少数为多肽。
厚度小于0.2um者称微荚膜;
大于或等于0.2um者称为荚膜或大荚膜;
若粘液性物质疏松的附着于菌的表面,边界不明显且易被洗脱者称为粘液层。
荚膜的形成条件:
1、营养丰富的培养基(含糖、血清);
2、有荚膜菌形成粘液型(M)、光滑型(S)菌落,失去荚膜后菌落变为粗糙型(R)
荚膜的功能:
①具有抗吞噬作用,是细菌致病重要的毒力因子,致病力强;
②粘附作用;
③抗有害物质的损伤作用。
鞭毛flagellum由蛋白质组成的结构,与细菌的运动有关;
有鉴别意义;
某些与致病性有关。
类型:
单毛菌,双毛菌,丛毛菌,周毛菌。
功能:
①是细菌的运动器官,趋利避害;
②与致病性有关;
③细菌的鉴定和分类。
菌毛pilus:
由蛋白质组成,短而直,光学显微镜不能观察到。
许多G-菌和少数G+菌具有。
分为:
①普通菌毛Commonpilusorfimbriae:
是细菌的粘附结构,能与宿主细胞的特异受体结合,介导细菌在局部定植,与细菌的致病性密切相关;
100-200/cell。
②性菌毛Sexpilus:
仅见于少数G-菌,数量少,中空呈管状。
由F质粒编码产生,与细菌的遗传变异有关。
可通过接合传递细菌的毒力和耐药性等。
芽胞endospore/spore某些细菌在一定条件下在菌体中形成的在光学显微镜下可见的一个圆形或卵圆型小体。
芽胞是细菌的一种特殊存活方式,而不是繁殖方式。
一个细菌只能形成一个芽胞,一个芽胞也只能生成一个菌体。
产芽胞的细菌在未产生芽胞时的菌体称为繁殖体(vegetativeform)。
芽胞的功能及意义:
①芽胞对理化因素(热、干燥、辐射、化学消毒剂等)具有高强度的抵抗力,如炭疽芽胞杆菌芽胞可在草原中存活20-40年。
②是否被杀死或破坏是判断灭菌效果的指标。
3.细菌形态与结构检查法
显微镜放大法;
染色法(革兰染色法Gramstain步骤:
涂片→固定→结晶紫初染→碘液媒染→95%酒精脱色→复红复染。
结果:
G+菌:
紫色G-菌:
红色。
意义:
鉴别细菌;
选择药物;
研究细菌致病性。
);
DNA测序法;
PCR检测法
思考题.1、细菌有哪三种形态?
2、细菌的基本结构和特殊结构有哪些?
特殊结构各有何作用?
3、G+菌和G-菌细胞壁的结构由哪几部分组成?
4、青霉素和溶菌酶为什么不能杀灭革兰阴性菌?
5、简述革兰染色法操作步骤。
第二章细菌的生理PhysiologyofBacterium
细菌的生理活动包括摄取营养物质和合成各种所需物质,进行新陈代谢及生长繁殖。
第一节细菌的理化性质
细菌的化学组成:
与其它生物细胞相似的成分:
包括水、无机盐、蛋白质、糖类、脂类与核酸等。
与其它生物细胞不同的成份:
如肽聚糖、磷壁酸、DPA等。
细菌的物理性状:
光学性质、带电现象、表面积、半透性、渗透压。
第二节细菌的营养与生长繁殖
细菌的营养物质:
要充足①水:
水是细菌重要成分之一;
②碳源:
合成菌体成份,细菌代谢的主要能量来源;
③氮源:
合成菌体的结构蛋白、功能蛋白与核酸等;
④无机盐:
构成菌体成份、调节菌体的外渗透压、激活酶的活性,还与细菌的致病性有关;
⑤生长因子:
某些微生物不能从普通的碳源、氮源等物质中合成,而必须另外加入少量才能满足机体生长需要的物质,维生素、氨基酸、碱基等。
细菌摄取营养物质的机制:
被动扩散;
主动转运(ABC转运:
依赖于周浆间隙结合蛋白的转运系统;
离子偶联转运:
化学渗透驱使转运系统;
基团转移;
特异性转运)
细菌的营养类型:
①自养菌(autotroph):
以简单的无机物为原料,利用CO2等作为碳源,利用N2、NH3等作为氮源,合成菌体成分。
为自然界正常菌群;
②异养菌(heterotroph):
只能以有机物为原料,如蛋白质、糖类等合成菌体成分获得能量;
③腐生菌(saprophyte):
动植物尸体等腐败物为营养料;
④寄生菌(parasite):
寄生于活宿主机体内,获取营养;
病原菌都是异养菌,大部分属寄生菌。
影响细菌生长的因素:
①营养物质;
②氢离子浓度(pH):
多数病原菌最适pH为7.2-7.6;
③温度:
多数病原菌最适温度为37℃;
④气体:
专性需氧菌:
如结核杆菌;
微需氧菌:
如空肠弯曲菌;
兼性厌氧菌:
大多数病原菌;
专性厌氧菌:
如破伤风梭菌(缺乏氧化还原电势高的呼吸酶,如细胞色素、细胞色素氧化酶;
缺乏分解有毒氧基团的酶:
SOD、触酶、过氧化物酶);
另外,CO2对细菌的生长也很重要;
不过大部分细菌在新陈代谢过程中产生的CO2可满足其需要。
⑤渗透压:
一般培养基渗透压适于大多数细菌。
细菌的生长繁殖:
个体生长繁殖:
无性繁殖方式,即二分裂。
多数细菌分裂一代需20~30min;
结核分枝杆菌需18~20h。
群体生长繁殖:
一定数量的纯种细菌接种于液体培养基,其生长过程表现一定的规律性,生长曲线。
细菌群体的生长繁殖:
迟缓期(lagphase)对数期(logarithmicphase)稳定期(stationaryphase)衰亡期(declinephase)
迟缓期对数期稳定期衰退期
细菌的生长曲线
不同生长期的意义:
迟缓期对数期稳定期衰亡期
适应阶段快速生长速度减慢死亡增加
形态染色产芽胞、形态显著
生理活性抗生素、改变典型
外毒素
第三节细菌的新陈代谢包括分解代谢与合成代谢;
分解代谢:
营养物质分解和转化为能量的过程;
合成代谢:
所产生的能量用于细胞组分的合成。
细菌的能量代谢发酵;
需氧呼吸;
厌氧呼吸。
分解代谢产物与细菌的生化反应:
利用不同种类的细菌在物质分解过程中生成不同产物的特点(具有不同或不完全相同的酶),以鉴别或区别不同的细菌而设计的实验技术统称为细菌的生化反应或细菌的生化试验(chemicaltestforbacteria)。
生化反应试验大多利用化学指示剂以利于观察。
常见的生化试验:
(1)糖发酵试验(Sugarfermentation)
(2)吲哚试验(Indoltest,I)
(3)甲基红试验(methyred,M)IMViC,常用于肠道杆菌的鉴定
(4)V-P试验(voges-proskauer)如大肠杆菌++--
(5)枸橼酸盐利用试验(citrateutilization,C)产气杆菌--++
(6)尿素酶试验
(7)硫化氢试验等。
糖发酵试验:
大肠埃希菌分解乳糖,产酸产气;
伤寒沙门菌不分解乳糖。
吲哚试验:
大肠杆菌有色氨酸酶,分解色氨酸产生吲哚;
甲基红试验:
大肠杆菌(+),产气杆菌(-)
V-P试验:
大肠杆菌(-),产气杆菌(+)
枸橼酸盐利用试验:
产气杆菌以枸橼酸盐为碳源、以铵盐为氮源→分解铵盐产氨(碱性)→指示剂淡绿变深蓝为阳性
尿素酶试验:
变形杆菌有尿素酶,可分解尿素产生氨→培养基变碱→酚红指示剂显红色
硫化氢试验:
变形杆菌、沙门菌分解含硫氨基酸产生硫化氢→遇铅或铁离子生成黑色的硫化物
合成代谢产物及其医学上的意义:
(1)热原质:
又称致热源,细菌合成的一种注入人体或动物体内可引起发热反应的物质,即脂多糖。
大多由革兰阴性菌产生。
特性:
耐高热,高压蒸气灭菌(120℃20min)不被破坏。
250℃高温干烤才能破坏。
意义:
热原质在人类的生活环境中普遍存在。
在制备和使用注射药品过程中应严格遵守无菌操作,防止革兰阴性细菌或热原质污染,否则会引起输液反应。
(2)毒素及侵袭性酶:
是细菌重要的致病因素。
(3)色素:
可分为水溶性(铜绿假单胞菌——绿色色素)和脂溶性(金黄色葡萄球菌——金黄色色素)两种,有助于细菌的鉴别。
(4)抗生素:
某些微生物在代谢过程中产生的一种能抑制和杀灭其他微生物或癌细胞的物质
(5)细菌素:
某些细菌产生的对有亲缘关系的细菌具有抗菌作用的蛋白质或蛋白质与脂多糖的复合物。
由于只能杀伤有亲缘关系的细菌(大肠菌素),故无治疗意义,但有助于细菌分型。
(6)维生素vitamins
第四节细菌的人工培养
培养基(medium):
培养基是人工配制的适合细菌生长繁殖的营养基质,调整pH为7.2~7.6,并经灭菌后即可使用。
可分为以下几种:
按营养与用途分类:
1.基础培养基(basicmedium):
能满足一般细菌生长繁殖的营养需要;
2.营养培养基:
供营养要求较高的细菌生长;
3.选择培养基(selectivemedium):
利用不同细菌对某种化学物质的敏感性不同而用于细菌的分离;
4.鉴别培养基(differentialmedium);
5.厌氧培养基(anaerobicmedium):
供厌氧菌生长繁殖。
按培养基的物理性状:
液体培养基(纯种培养,增菌);
固体培养基(分离纯化);
半固体培养基(观察细菌的动力和短期保存)。
(1)在液体培养基中的生长情况:
均匀混浊生长;
沉淀生长;
菌膜生长;
(2)在半固体培养基中的生长情况:
无鞭毛细菌:
沿穿刺线生长;
有鞭毛细菌:
扩散生长;
(3)在固体培养基中的生长情况:
菌落:
由单个细菌繁殖形成的肉眼可见的细菌集团(有光滑型S,粗糙型R,粘液型M)。
菌苔:
由两个以上菌落融合而成。
人工培养细菌的用途及意义:
1、在医学中的应用:
传染性疾病的诊断;
细菌的鉴定与研究;
生物制品的制备;
作细菌毒力分析及卫生学指标的检测;
2、在工农业生产中的应用;
3、在基因工程中的应用。
第五节抑制或杀灭微生物的理化因素
消毒灭菌的常用术语:
消毒(disinfection):
杀灭物体中某些病原微生物的方法;
灭菌(sterilization):
杀灭所有微生物的方法,包括病原微生物和非病原微生物、繁殖体和芽胞;
防腐(antisepsis):
抑制细菌生长繁殖的方法,亦称为抑菌(bacteriostasis);
清洁(cleaning):
是指通过除去尘埃和一切污秽以减少微生物数量的过程;
无菌(asepsis):
不含活菌;
无菌操作(asepsismanipulation)。
消毒、灭菌的原则:
1.明确消毒的主要对象:
应具体分析引起感染的途径、涉及的媒介物及病原微生物的种类,有针对性地使用消毒剂;
2.采取适当的消毒方法:
根据消毒对象选择简便、有效、不损坏物品、来源丰富、价格适中的消毒方法。
消毒、灭菌的方法:
1.物理消毒灭菌法:
热力灭菌法;
辐射杀菌法;
滤过除菌法;
干燥;
低温抑菌法;
超声波;
渗透压等。
热力灭菌法:
可以分为干热灭菌法和湿热灭菌法两大类
1、干热灭菌法:
作用机制:
使菌体脱水干燥、大分子变性。
80~100℃1h可杀死繁殖体,160~170℃2h可杀死芽胞。
常用方法有焚烧、干烤、烧灼、红外线等。
2、湿热灭菌法:
在水分子存在情况下更易于使菌体蛋白凝固,热力穿透性更强。
巴氏消毒法:
61.1-62.8℃,30min或者71.7℃,15-30sec;
煮沸消毒法:
100℃,5min-10min;
流通蒸气消毒法:
100℃,15-30min;
间歇蒸汽灭菌法:
100℃,15-30min,37℃过夜(连续3次);
高压蒸气灭菌法:
15磅(121.3℃),15-30min(灭菌效果最好、应用最为广泛的一种方法。
原理:
利用高压和高热释放的潜热进行灭菌。
适用于耐高温、耐高压且不怕潮湿的物品,如敷料、手术器械、药品、生理盐水、细菌培养基等。
)
湿热比干热灭菌好的原因:
细菌的蛋白质在有水的情况下易于凝固变性;
湿热的穿透力强;
湿热蒸气有潜热存在,水蒸气凝固成水释放潜热,迅速提高被灭菌物体的温度。
辐射杀菌法radiation:
电离辐射;
非电离辐射(紫外线、日光、微波)
1、电离辐射:
包括X射线和γ射线;
干扰DNA的合成;
破坏细胞膜;
产生过氧化氢、超氧阴离子等。
特点:
穿透力强,不升高温度。
用途:
主要用于消毒不耐热的塑料制品以及粮食、食品等的消毒。
缺点:
安全性。
2、紫外线:
破坏细菌的DNA结构,中断DNA的复制与转录,使同一条DNA链上相邻的嘧啶以共价键连成二聚体,导致细菌死亡。
紫外线波长265~266nm最强。
穿透力弱。
3、微波:
主要通过产热使被照射物品的温度升高,导致杀菌作用;
其次化学效应、电磁共振效应和场致力效应等。
用途:
非金属器械的消毒,如实验室用品、食用器具等,以及食品、药品的消毒。
4、日光:
其杀菌作用主要是通过其中的紫外线来实现。
只能作为辅助消毒的手段。
滤过除菌法:
利用物理阻留、静电吸附等原理除去介质中的微生物。
通过过滤除菌可使病室、手术室或无菌药物控制室内的空气达到绝对净化的目的。
主要用于一些不耐高温灭菌的血清、毒素、抗生素以及空气等的除菌。
但不能除去病毒、衣原体和某些L型细菌。
干燥与低温抑菌法:
干燥:
没有水,细菌会停止代谢而死亡。
低温:
不能用来灭菌,仅能抑制微生物的生长。
常用于菌种的保存。
冷冻真空干燥法:
也称为升华干燥,是目前保存菌种的最好方法,其原理是将材料冷冻,使其含有的水份变成冰块,然后在真空下使冰升华而达到干燥目的。
2.化学消毒灭菌法:
消毒剂的作用机制:
1.使菌体蛋白质变性或凝固:
如酚类、醇类、重金属盐类、烷化剂等。
2.干扰细菌的酶系统和代谢:
如氧化剂(过氧化氢、过氧乙酸、高锰酸钾等)可与细菌的酶结合,使之失去活性。
3.损伤菌细胞膜,影响细菌的化学组成、物理结构和生理活动。
化学消毒剂的类型:
1.高效消毒剂(high-leveldisinfectants):
可杀灭包括芽胞在内的所有微生物,如含氯消毒剂、过氧化物消毒剂、醛类消毒剂、环氧乙烷等;
2.中效消毒剂(intermediate-leveldisinfectants):
可以杀死细菌的繁殖体,但不能杀死芽胞,如含碘消毒剂、醇类消毒剂;
3.低效消毒剂(low-leveldisinfectants):
可杀灭多数细菌的繁殖体,但不能杀死芽胞、结核杆菌以及某些抵抗力较强的真菌和病毒,如季铵盐类、氯已定、高锰酸钾等。
化学消毒灭菌剂的使用原则:
1.根据物品的性能及病原体的特性,选择合适的消毒剂;
2.严格掌握消毒剂的有效浓度、消毒时间和使用方法;
3.需消毒的物品应洗净擦干,浸泡时打开轴节,将物品浸没于溶液里;
4.消毒剂应定期更换,挥发剂应加盖并定期测定比重,及时调整浓度;
5.浸泡过的物品,使用前需用无菌等渗盐水冲洗,以免消毒剂刺激人体组织。
常用的化学消毒灭菌方法:
1.浸泡法:
选用杀菌谱广、腐蚀性弱、水溶性消毒剂,将物品浸没于消毒剂内,在标准的浓度和时间内,达到消毒灭菌目的;
2.擦拭法:
选用易溶于水、穿透性强的消毒剂,擦拭物品表面,在标准的浓度和时间里达到消毒灭菌目的;
3.薰蒸法:
加热或加入氧化剂,使消毒剂呈气体,在标准的浓度和时间里达到消毒灭菌目的。
适用于室内物品及空气消毒或精密贵重仪器和不能蒸、煮、浸泡的物品(血压计、听诊器以及传染病人用过的票证等),均可用此法消毒;
4.喷雾法:
借助普通喷雾器或气溶胶喷雾器,使消毒剂产生微粒气雾弥散在空间,进行空气和物品表面的消毒;
5.环氧乙烷气体密闭消毒法:
将环氧乙烷气体置于密闭容器内,在标准的浓度、湿度和时间内达到消毒灭菌目的。
选择适当消毒剂:
低毒,低破坏,廉价,方便,易储存,有效。
消毒灭菌的运用:
1.医疗器械物品的消毒灭菌:
高危器械物品:
使用时需进入无菌组织的物品,所有这些物品都应该灭菌;
中危器械物品:
使用时不进入无菌组织、但接触黏膜的器械,采用消毒即可;
低危器械物品:
只接触未损伤皮肤、不进入无菌组织,也不接触黏膜的物品,一般用后清洗、消毒即可;
快速周转的医疗器械。
2.室内空气消毒灭菌:
物理消毒法:
①紫外线照射(1.5W/m3,1h)最常用;
②滤过除菌:
空气通过孔径小于0.2μm的高效过滤装置以除去细菌和带菌尘埃;
化学消毒法:
包括化学消毒剂喷雾和熏蒸。
①过氧乙酸喷雾、熏蒸;
②过氧化氢喷雾;
③二氧化氯溶液喷洒;
④中草药点燃烟熏。
3.手和皮肤的消毒:
用肥皂和流动水经常并正确的洗手是预防许多病原微生物感染的有效
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