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Pb与Vc对蛋仔鸡肝脏脂质过氧化的影响
编号(学号):
04101149
西北农林科技大学
2005届本科毕业论文(设计)
题目:
Pb与Vc对蛋仔鸡肝脏脂质过氧化的影响
姓名:
杨彩娟
专业:
动物科学
班级:
01级动科(5)班
学号:
04101149
院(系):
动物科技学院
指导教师:
孙超
完成日期:
2005年6月10日
目录
摘要:
2
关键词:
2
Abstract:
2
Keywords:
2
1材料与方法3
1.1材料3
1.1.1试验动物3
1.1.2仪器与试剂3
1.2饲料营养成分与营养成分4
1.3方法4
1.3.1饲喂方法4
1.3.2分组方法4
1.3.3指标测定方法4
1.3.4数据统计方法5
2 结果与分析5
2.1Pb与Vc对蛋仔鸡肝脏中SOD活性的影响5
2.2Pb与Vc对蛋仔鸡肝脏中MDA的影响6
2.3Pb与Vc对蛋仔鸡肝脏中POD的影响7
2.4Pb与Vc对蛋仔鸡肝脏中CAT的影响8
3讨论与小结8
3.1关于Pb对蛋仔鸡肝脏中脂质过氧化物的影响9
3.2关于维生素C对蛋仔鸡肝脏中抗氧化物酶的影响9
3.3关于Pb与Vc对蛋仔鸡肝脏中MDA的影响9
3.4关于Vc对Pb的影响10
参考文献10
致谢11
Pb与Vc对蛋仔鸡肝脏脂质过氧化的影响
毕业生:
杨彩娟指导老师:
孙超
(西北农林科技大学动物科技学院陕西杨凌712100)
摘要:
三日龄健康蛋用公仔鸡120只,随机分为10组(每组12只),在饲喂普通鸡用饲料的基础上每天用针管给鸡注射一定量的Vc、Pb、Vc+Pb以及不注射任何物质。
Vc用量为200mg/kg,Pb分为四个梯度分别是20 mg/kg、50mg/kg、80mg/kg、110mg/kg。
试验期为两周。
试验结束,立即剖检,采取肝脏样品,冷藏(-70℃)48h后检测其超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、过氧化物酶(POD)的活性和丙二醛(MDA)的含量。
结果表明Vc+Pb与Vc组的SOD、CAT、POD活性均高与对照组,Vc组与对照组相比差异极显著(P〈0.01〉;Pb组活性则低与对照组。
Vc组的MDA含量比对照组底,差异显著(P〈0.05);Vc+Pb、Pb组的MDA含量则均高于对照组。
由此可以看出,Vc可以提高鸡的抗氧化能力,并对Pb中毒有拮抗作用。
关键词:
蛋仔鸡,Vc,Pb,脂质过氧化
EffectsofplumbumandvitaminConliverlipidperoxidesactivityinchicken
Student:
YangCaijuanSupervisor:
SunChao
(MajorofAnimalscience,CollegeofAnimalscience,NorthwestSci-TechUniversityofAgricultureandForestry)
Yangling,shanxi,712100
Abstract:
120twentyonedayoldhealthychickenswererandomlydividedintotengroups(everygrouphas12chickens).ThegroupwerefedthecommonfodderandgivevitaminC、plumbumandthemixturesofthesetwothings.ThedosageofthevitaminCis200mg/kg.Thedosageofplumbumhadfourgrads20mg/kg、50mg/kg、80mg/kgand110mg/kg.Theexperimentlaststwoweeks.Attheendoftheexperiment,theliversamplesweretakenforexaminationOftheSODPODandCATactivityandMDAcontent.TheresultsshowedthatInvitaminCandthemixturestestedgroupstheSOD、PODandCATactivitieswerehiger.ThevitaminCgroupismuchhigherthanthecomparison.Buttheplumbumgrouphadreverseresult.TheMDAcontentofvitaminCgroupwaslowerthanthecomparison.ThevitaminCandplumbumgroupwerehiger.ItwasalsoshowthatvitaminCcanimprovethechicken’sabilityofagainstlipidperoxidationandcandecreasethetoxicoftheplumbum.
Keywords:
chickenplumbumvitaminClipidperoxidation
脂质过氧化作用(LP)是指活性氧、自由基攻击生物膜中多聚不饱和脂肪酸(PUFA)而引起的一系列氧化过程,此过程可产生一系列脂质过氧化物(LPO),LPO的分解产物可引起细胞的损伤,导致细胞结构和功能的改变。
生理情况下,体内存在着的抗氧化防御系统在一定程度上能防止脂质过氧化的发生,使机体自由基的产生与清除处于平衡状态。
在机体清除自由基的过程中,抗氧化酶起着重要的作用,而起主要作用的抗氧化酶有SOD和GSH2Px。
目前,环境污染越来越严重,严重威胁着人们的健康和生命,重金属污染也是环境污染的一种,重金属可以引起人们很多的疾病,引起各种不适和中毒症状,影响人们的工作和学习。
为此,国内外的很多科学工作者做出了很大的努力来研究它们的致病作用机理,希望可以通过研究研制开发相关的药物以消除重金属对人们可能造成的危害,对很多的重金属的研究已比较详尽,如砷,硒等。
它门引起各种地方病。
但仍有很多不足,有些元素的致病机理仍在摸索和研究阶段,比如本文中要研究的铅,铅为古老的金属毒物,可以通过呼吸道,损伤的皮肤及消化道进入机体,生产性铅中毒及非生产性铅中毒时有报道,他能引起神经症状,腹泻,消化不良,便秘等等症状。
铅毒性肝损伤目前尚无特异的生化指标,近年来有人认为SOD活性可以作为铅接触评价指标,SOD广泛存在与各种生物体内,它能特异的清除自由基的损害作用,而自由基有损伤核酸,蛋白质作用,从而加速机体衰老,而SOD能使机体在病损时的自由基产生和消除,保持动态平衡,从而使机体产生防护,抗衰老,抗炎,抗肿瘤,抗辐射以及抗自身免疫性疾病及抗氧中毒等作用。
已有实验证明铅能使SOD活性下降。
所以铅能使肝脏脂质过氧化程度增强。
维生素C对鸡的肝脏脂质过氧化的影响更是早有研究,据研究Vc对肝脏的脂质过氧化有抑制作用,随着VC的增加,肝脏脂质过氧化物有减少的趋势。
维生素C是重要的非特异性抗自由基物质,它可以清除氢氧基、过氧化物和超氧化物等自由基(Shankaranetal.,2001;Smithetal.,1999);同时它以时间依赖性方式进入细胞内,改善细胞内的氧化还原状态(张泉三等,2002)。
维生素C很可能通过它对自由基的灭活作用,中断了自由基的连锁反应,,减少了自由基的攻击,,从而降低了机体内脂质过氧化物的含量。
虽然,VC和铅单独对鸡肝脏脂质过氧化的研究已取得了一定的成果,但研究也不是很详尽,有待更深入的了解。
对两物质的共同作用的研究更是少见。
本实验旨在研究Pb、Vc和Pb+Vc对蛋仔鸡肝脏脂质过氧化的影响,找出Vc、Pb的配比关系,以求在现实生活中把铅对生物的危害将到最低,可以消除环境中铅对生物的危害,了解重金属铅的毒害作用是不容小视的,一定要在平时的生活中提高警惕,保护环境。
1材料与方法
1.1材料
1.1.1试验动物健康蛋仔鸡(3日龄,进行常规免疫)120只,由西北农林科技大学畜牧站提供。
1.1.2仪器与试剂
醋酸铅(Pb(CH3COO)23H20)、Vc、双氧水、磷酸缓冲液、硫代巴比妥酸(TBA)、甲硫氨酸(Met)溶液、氮蓝四唑溶液(NBT)、核黄素溶液等;721分光光度计、冰箱、恒温水浴、微量加样器、具塞试管、低温高速离心机、研钵、紫外分光光度计等。
1.2饲料营养成分与营养成分
表1饲料营养成分分析Table1Theanalysisofthefeedstuff
粗灰分钙磷粗纤维粗脂肪粗蛋白干物质无氮浸出物能量(卡/g)
(%)(%)(%)(%)(%)(%)(%)(%)
8.341.510.611.494.1418.9589.9056.984923.8
表20-6周龄蛋鸡营养水平(ZBB43005-86)Table2Thenutritionlevelof0-6weeksoldchicken
代谢能粗蛋白蛋白能量比 钙 总磷有效磷 食盐 蛋氨酸
(MJ/kg)(%)(g/MJ) (%) (%) (%) (%) (%)
11.9218.0 150.800.700.40 0.37 0.30
1.3方法
1.3.1饲喂方法
自由采食,Pb和Vc配成一定浓度的溶液用针管从嘴里注入(0.2ml/只)。
1.3.2分组方法
随机分成10组(每组12只),Pb为四个梯度,有Pb1、Pb2、Pb3、Pb4、Vc+Pb1、Vc+Pb2、Vc+Pb3、Vc+Pb4、Vc和普通对照组。
1.3.3指标测定方法
丙二醛(MDA)采用硫代巴比妥法进行测定;超氧化物歧化酶(SOD)活性通过抑制氮蓝四唑(NBT)在光下的还原作用来测定;过氧化物酶(POD)活性用测量双氧水的分解率的方法确定;过氧化氢酶(CAT)采用紫外吸收法,H2O2在240nm波长下有强吸收,CAT能分解过氧化氢,使反应溶液吸光度随反应时间而降低。
1.3.4数据统计方法用方差分析并作组间比较。
2 结果与分析
2.1Pb与Vc对蛋仔鸡肝脏中SOD活性的影响
经过对蛋仔鸡肝脏中SOD活性进行测定,具体结果见表3及图1。
表3肝脏中SOD活性的变化
Table3ThechangeofSODcontentinliver
组别
SOD
Vc
Pb1
Pb2
Pb3
Pb4
7938.0685±456.12*
5856.0866±368.38**
5446.9596±330.26**
5100.2458±312.45**
4524.1495±254.66**
Vc+Pb1
7572.2081±435.69**
Vc+Pb2
6945.5162±397.68**
Vc+Pb3
6447.2128±370.54
Vc+Pb4
6059.1495±361.24
普对
6179.3174±365.20
注:
(试验用鸡120只,每组12只.与普通对照组相比“*”表示差异极显著;“**”表示差异显著)
图1Pb与Vc对蛋仔鸡肝脏中SOD活性的影响结果
由表3及图1表明,Vc组与普通对照组相比该酶的活性显著升高,差异极显著(P<0.01),Vc用量200mg/kg。
Pb1和Pb2组酶的活性比普通对照组低,差异显著(P<0.05)。
Pb3和Pb4与普通对照组相比差异极显著(P<0.01)。
Vc+Pb1和Vc+Pb2组SOD活性显著高于普通对照组(p<0.05)。
Vc+Pb3和Vc+Pb4与普通对照组相比差异不显著。
Vc+Pb和只加Pb组相比差异显著(P<0.05)。
2.2Pb与Vc对蛋仔鸡肝脏中MDA的影响
经过对蛋仔鸡肝脏中MDA活性进行测定,具体结果见表4及图2。
表4肝脏中MDA含量的变化
Table4ThechangeofMDAinliver
组别
SOD
Vc
Pb1
Pb2
Pb3
Pb4
4.7563±1.231**
6.6472±2.300
7.6746±2.451
18.762±3.542*
18.5761±3.24*
Vc+Pb1
8.4050±1.98**
Vc+Pb2
8.2636±1.595**
Vc+Pb3
8.7322±2.314**
Vc+Pb4
8.5000±2.165**
普对
6.5286±1.698
注:
(试验用鸡120只,各组设置12个重复,与普通对照组相比“*”表示差异极显著;“**”表示差异显著)
图2Pb与Vc对蛋仔鸡肝脏中MDA含量的影响结果
由表4及图2可见,Vc组与普通对照组相比MDA的含量显著降低(P<0.05)。
Pb1和Pb2组对照组相比差异不显著。
Pb3、Pb4的MDA含量比对照组显著升高(P<0.01).Vc+Pb组的与对照组相比差异显著(P<0.05).Vc+Pb1和Vc+Pb2组的活性与Pb1、Pb2相比没有明显变化。
2.3Pb与Vc对蛋仔鸡肝脏中POD的影响
经过对蛋仔鸡肝脏中POD活性进行测定,具体结果见表5及图3。
表5肝脏中POD的活性变化
Table5ThechangeofPODactivityinliver
组别
SOD
Vc
Pb1
Pb2
Pb3
Pb4
2.2222±0.169*
1.1204±0.085*
0.9406±0.017*
1.1002±0.032*
0.7298±0.024*
Vc+Pb1
1.5410±0.108**
Vc+Pb2
1.5342±0.094
Vc+Pb3
1.4644±0.1001
Vc+Pb4
1.4301±0.072
普对
1.3891±0.094
注:
(试验用鸡120只,各组设置12个重复,与普通对照组相比“*”表示差异极显著;“**”表示差异显著)
图3Pb与Vc对蛋仔鸡肝脏中POD活性的影响结果
由表5及图3可见,Vc组的酶活性显著高与对照组,差异极显著(P<0.01).各个梯度加铅组的酶活性与普通对照组相比差异极显著(P<0.01).Vc+Pb1组与对照组相比差异显著。
Vc+Pb组与普通对照组相比差异不显著.Vc+Pb组与只加铅的各组相比差异极显著(P<0.01).
2.4Pb与Vc对蛋仔鸡肝脏中CAT的影响
经过对蛋仔鸡肝脏中CAT活性进行测定,具体结果见表6及图4。
表6肝脏中CAT的活性变化
Table6ThechangeofCATactivityinliver
组别
SOD
Vc
Pb1
Pb2
Pb3
Pb4
358.0240±58.65*
145.0529±21.23*
98.7903±18.05*
82.0987±14.33*
64.1172±12.56*
Vc+Pb1
350.2000±67.65*
Vc+Pb2
270.2124±41.32
Vc+Pb3
250.4126±35.41
Vc+Pb4
232.0988±30.80
普对
232.4200±32.23
注:
(试验用鸡120只,各组设置12个重复,与普通对照组相比“*”表示差异极显著;“**”表示差异显著)
图4Pb与Vc对蛋仔鸡肝脏中CAT活性的影响结果
由表6及图4可见,Vc组的过氧化氢酶活性与普通对照组相比差异极显著(P<0.01)。
各加铅组的酶活性显著低于普通对照组,差异极显著(P<0.01)。
Vc+Pb1组的酶活性显著高于普通对照组(P<0.01)。
剩余几组的酶活性与对照组相比酶活性变化不大。
Vc+Pb组与各个梯度的加Pb组相比酶活性差异极显著(P<0.01)。
3讨论与小结
3.1关于Pb对蛋仔鸡肝脏中脂质过氧化物的影响
脂质过氧化已成为实验病理学和毒理学等学科的重要理论之一,被认为是机体损伤的一种特殊形式,许多化学物的毒理作用与生物膜的脂质过氧化有关。
本试验对3日龄的鸡给予铅使其中毒,结果肝脏中的脂质过氧化物增加,所测各种酶活性都显著低于普通对照组,说明在铅中毒的过程中产生自由基,引起氧化应激,肝脏是铅的主要蓄积部位,也是铅毒作用的主要靶器官。
目前普遍认为,铅中毒主要是由于卟啉代谢障碍所致,铅可与体内一系列醇和蛋白质的功能团(如琉基)配舍,使相应的代谢过程受到影响,从而干扰机体许多方面的生化和生理活动。
近年的研究表明,铅可诱发组织脂肪酸的改变及增加脂质过氧化。
[1]陈敏,谢吉民等所做的铅对小鼠肝肾毒作用的机理探讨试验显示小鼠染铅后,肝脏的LFO值显著高于对照组,并有明显的剂量一效应关系。
表明铅对肝组织具损伤作用。
这与本试验所测结果一致。
3.2关于维生素C对蛋仔鸡肝脏中抗氧化物酶的影响
抗氧化物酶如超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)和过氧化物酶(POD)是氧自由基酶防御系统,对清除氧自由基,减少细胞脂质过氧化损害具有重要作用。
[5]周显青,李胜利等的研究表明,维生素C多聚磷酸酯添加量为2500和5000mg/kg的两组能明显提高超氧化物歧化酶和过氧化氢酶的活性,维生素C多聚磷酸酯添加量为5000mg/kg的一组,能明显提高过氧化物酶的活性。
这与本试验的研究结果一致,说明Vc是一种重要的非特异性抗自由基物质,它可以清除氢氧基、过氧化物和超氧化物等自由基。
维生素C对抗氧化物酶的促进作用,可能是由于它对自由基的灭活作用,从而降低了体内抗氧化物酶的消耗,升高抗氧化物酶的活性。
因为超氧化物歧化酶是体内以O2-为惟一底物的天然酶类和自由基连锁反应的阻断剂,它可特异性地催化超氧化物自由基歧化为过氧化氢和氧;过氧化氢在过氧化氢酶和谷胱甘肽过氧化物酶的作用下,可还原为无毒性的水和氧(Drewaetal.,1998;Smithetal.,1999);谷胱甘肽过氧化物酶是抗脂质过氧化的一种重要酶,可介导还原型谷胱甘肽催化脂质过氧化物分解成相应的无毒害作用的醇。
3.3关于Pb与Vc对蛋仔鸡肝脏中MDA的影响
本试验对蛋仔鸡在饲喂过程中给予铅和维生素C,试验结束剖检后进行实验室检测,发现不同梯度加铅组的过氧化氢酶、超氧化物歧化酶、过氧化氢酶的活性都显著低于只喂普通饲料的鸡,丙二醛的含量则升高。
而灌服维生素C的鸡所述几中酶的活性则比普通对照组的鸡显著升高,MDA含量则显著降低。
既灌服铅又注如维生素C的鸡以上所测指标均介于二者之间。
这些结果表明,维生素C可能具有分解或抑制脂质过氧化物产生的作用。
这与[15]李莲姬,韩春姬所做的锌、硒对铅致小鼠脂质过氧化的试验结果有一致性。
发现一定剂量的铅使小鼠血、脑组织谷胱甘肽过氧化物酶活性明显降低。
脂质过氧化作用中间产物丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量明显升高。
自由基与脂质过氧化是许多毒物产生毒作用的起点。
铅在体内可能作为自由基的启动剂激活参与脂质过氧化作用的某些酶,促使机体游离基脂质过氧化反应。
因而使MDA含量比正常水平高。
Vc则可以清除自由基使脂质过氧化受到抑制。
使MDA的含量降低。
3.4关于Vc对Pb的影响
鸡给予铅使肝脏的LPO增加,说明铅中毒时产生自由基,引起氧化应激。
然而,若同时服用Vc的鸡再给予铅时,肝LPO减低,进一步证实了自由基的产生和Vc的抗氧化剂作用对自由基的清除。
结合于膜的铅可使内膜脂质更易于发生氧化损伤。
有研究表明,在体外试验中,加入铅使Vc缺乏大鼠红细胞机械脆性的增加大于Vc充足大鼠,在Vc缺乏动物,铅的溶血作用可能是受铅中毒的原因。
本研究表明,铅在肝脏诱导LPO,而加入Vc可降低铅诱导的脂质过氧化物.这与文献报道[16]一致。
参考文献
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[18]DeckerEA
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