人源化抗体的制备策略_精品文档.pptx
- 文档编号:2570582
- 上传时间:2022-11-01
- 格式:PPTX
- 页数:6
- 大小:253.75KB
人源化抗体的制备策略_精品文档.pptx
《人源化抗体的制备策略_精品文档.pptx》由会员分享,可在线阅读,更多相关《人源化抗体的制备策略_精品文档.pptx(6页珍藏版)》请在冰豆网上搜索。
人源化抗体的制备策略有哪些,目录,一、嵌合抗体,二、CDR移植的人源化抗体,三、完全人源化抗体,1.抗体库技术,2.转基因小鼠技术,一、嵌合抗体,应用DNA重组技术将小鼠抗体基因上的可变区与人抗体基因的恒定区重组,再将重组后的基因导入骨髓瘤细胞中表达。
根据所用的载体质粒标记基因产物,选用适当的抗生素或制剂进行筛选,再用与传统技术相似的方法克隆出分泌人鼠嵌合抗体的细胞株。
二、CDR移植的人源化抗体,鼠源性抗体V区中的FR仍残留一定的免疫原性,这种抗体还远非真正的人源化抗体,有些还能产生很强的抗独特型反应。
为减少鼠源成分,人们进一步用人的FR替代鼠FR,形成更为完全的人源化抗体,即除了3个CDR是鼠源的外,其余全部是人源结构,又称CDR移植抗体(CDR-graftedantibody)或改型抗体(reshapedantibody)。
三、完全人源化抗体,1.抗体库技术噬菌体抗体库技术的产生依赖于3项实验技术的发展:
一是PCR技术的发展使人们可以用一组引物(免疫球蛋白可变区中骨架部分的保守序列),通过RT-PCR直接从B淋巴细胞总RNA克隆出全套免疫球蛋白可变区基因,从而使抗体库的构建简单易行;二是噬菌体展示技术(即将抗体通过与噬菌体外壳蛋白融合表达在噬菌体的表面,进而经亲和富集法筛选表达有特异活性的抗体)的建立,实现了基因型和表型的统一,提供了高效率的筛选系统,这是噬菌体抗体库技术的核心;三是从大肠杆菌分泌表达有结合功能的免疫球蛋白分子片段。
噬菌体抗体库将基因型和表型统一于一体,将选择能力与扩增能力偶联起来,具有强大的筛选功能,能够在体外模拟体内的抗体生成过程,使抗体工程技术进入了一个新的时代。
噬菌体抗体库技术的发展使体外不经过免疫获得抗体成为可能。
由于它发生于体外,因此不依赖体内抗原识别和提呈系统,在理论上可以产生抗任何物质的抗体。
目前噬菌体抗体库技术也存在不足之处,如从未经免疫动物的抗体库获得的抗体亲和力不高、受外源基因转化率的限制、抗体库的库容不足以涵盖一些动物的抗体多样性等。
因此,大容量抗体库是获得高亲和力抗体和针对稀有抗原抗体的关键。
2转基因小鼠技术,通过基因敲除技术使小鼠自身的基因失活并导入新基因,创造出携带人体抗体重、轻链基因簇,而自身抗体基因失活的转基因小鼠。
这种转人抗体基因小鼠(humanantibodymouse,HuMab)所携带的人DNA片段具有完备的功能,可以有效地进行同种型转换和亲和力成熟。
转基因小鼠制备的人抗体,其功效优于其他技术生产的抗正常人体蛋白单抗。
小鼠识别抗原和动员抗原的抗体系统仍保持完整,容易把人体蛋白识别为异物。
此外,由于抗体是体内产生的,经历了正常装配和成熟过程,从而保证成品具有较高的靶结合亲和力。
但转基因小鼠也存在一些缺陷,即转基因通常有体细胞突变和其他独特的序列,导致不完整的人序列;而且,由于抗体是在小鼠体内装配,因而产生的单抗具有鼠糖基化的模式,所以这些单抗最终并不是全人源化的。
谢,谢,THANKYOU,
- 配套讲稿:
如PPT文件的首页显示word图标,表示该PPT已包含配套word讲稿。双击word图标可打开word文档。
- 特殊限制:
部分文档作品中含有的国旗、国徽等图片,仅作为作品整体效果示例展示,禁止商用。设计者仅对作品中独创性部分享有著作权。
- 关 键 词:
- 人源化 抗体 制备 策略 精品 文档