原核表达之宿主菌株选择指南.docx
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原核表达之宿主菌株选择指南
原核表达之宿主菌株选择指南
在原核蛋白表达进程中,选择构建一个适合原核表达体系需要综合考虑3大因素:
表达载体、宿主菌株、表达诱导条件,以取得最中意的表达到效。
事实上,在平常的实验中,最容易被轻忽的确实是宿主菌的选择——多数人会直接选择自己实验室曾经用过的表达菌株,或是载体配套的菌株,而不去追究缘故——即便表达结果不佳,大多在表达条件和载体上找缘故,也可不能考究菌株的选择是不是适合。
作为原核表达的宿主,对外源基因的表达会产生必然的阻碍,是勿庸置疑的。
每一个宿主细胞都像一个微观的小工厂,依照细胞固有的程序完成“你给它们安排的生产任务”——因为很难亲眼观看微观世界中表达是如何进行的,当显现问题时,咱们需要体会判定问题所在。
宿主细胞对原核表达可能会产生哪些阻碍呢?
知其然还要知其因此然。
比如,菌株内源的蛋白酶过量,可能会造成外源表达产物的不稳固,因此一些蛋白酶缺点型菌株往往成为理想的起始表达菌株。
可谓经典的BL21系列确实是lon和ompT蛋白酶缺点型,也是咱们超级熟悉的表达菌株。
赫赫有名的BL21(DE3)融源菌那么是添加T7聚合酶基因,为T7表达系统而设计。
真核细胞偏爱的密码子和原核系统有不同,因此,在用原核系统表达真核基因的时候,真核基因中的一些密码子关于原核细胞来讲可能是稀有密码子,从而致使表达效率和表达水平很低。
改造基因是比较麻烦的做法,Rosetta2系列确实是更好的选择——这种携带pRARE2质粒的BL21衍生菌,补充大肠杆菌缺乏的七种(AUA,AGG,AGA,CUA,CCC,GGA及CGG)稀有密码子对应的tRNA,提高外源基因、尤其是真核基因在原核系统中的表达水平。
(已经携带有氯霉素抗性质粒)
当要表达的蛋白质需要形成二硫键以形成正确的折叠时,能够选择K–12衍生菌Origami2系列,thioredoxinreductase(trxB)和glutathionereductase(gor)两条要紧还原途径双突变菌株,显著提高细胞质中二硫键形成概率,增进蛋白可溶性及活性表达。
(卡那霉素灵敏)
Rosetta-gami%26#8482;2那么是综合上述两类菌株的优势,既补充7种稀有密码子,又能够增进二硫键的形成,帮忙表达需要借助二硫键形成正确折叠构象的真核蛋白。
(卡那霉素灵敏)
OrigamiB是衍生自lacZY突变的BL21菌株,那个突变能依照IPTG的浓度精准调剂表达产物,使得表达产物量呈现IPTG浓度依托性。
(四环素灵敏)
在决定试用这些名字怪僻的菌株时,有几个小Tips要注意的,一个是不同菌株有时已经携带某个质粒或已经具有某种抗生素抗性,要注意自己的表达质粒是不是能与之兼容。
比如Rosetta2已经携带有氯霉素抗性质粒,不能再用氯霉素挑选等等。
现象
可能原因
改进方案
建议菌株
无蛋白表达
E.coli的密码子偏移性
补充稀有密码子的tRNA;将稀有密码子突变为普通大肠杆菌密码子
Rosetta2
Rosetta-gami2
Rosetta-gamiB
RosettaBlue
出现截短蛋白
包涵体
二硫键形成困难
降低宿主胞质的还原性;利用促进二硫键形成的各种载体标签
Origami2
Rosetta-gami2
Rosetta-gamiB
表达过快,表达量过高
控制优化表达水平:
降温,IPTG浓度优化
Tuner
Rosetta-gamiB
蛋白无活性
蛋白错误折叠
降低宿主胞质的还原性;利用促进二硫键形成的各种载体标签
Origami2
Rosetta-gami2
Rosetta-gamiB
控制优化表达水平:
降温,IPTG浓度优化
Tuner
Rosetta-gamiB
细胞死亡,生长极困难
毒性蛋白
更严格的本底表达控制
pLysS菌株
无克隆生长
过高本底表达
更严格的本底表达控制
pLysS、pLysE菌株
重组质粒和菌株的保留建议
在实验室里保留重组菌株的时候,为了挑菌和传代方便,咱们经常使用LB平板保留在4℃冰箱中,需要提质粒和表达接种的时候,就直接从平板上挑菌,可是这种方式关于重组质粒的稳固性不利,容易显现质粒丢失、表达水平不稳固、菌株退化乃至发生污染等情形。
咱们建议:
1、长期存放菌株和pET重组子应该存在甘油-70℃保种。
可是要注意高浓度甘油(%26gt;10%)会致使质粒不稳固。
请尽可能维持甘油浓度8%。
(15%浓度的甘油保种液和新鲜菌液1:
1就行)
2、重组质粒不宜长期保存于表达菌株(带DE3的大肠杆菌)中,请尽量使用带有recAendA突变的克隆菌株(比如C600,DH5a)进行质粒抽提和保存质粒。
表达型的菌株提质粒经常会有质量不高或者背景的问题。
特别是大量抽提。
其实不单单是表达,建库克隆都会涉及菌株的不同要求,推荐看看以下文章:
。
感受态不是目的,菌株的背景才是关键。
原核表达
将克隆化基因插入合适载体后导入大肠杆菌用于表达大量蛋白质的方法一般称为原核表达。
这种方法在蛋白纯化、定
位及功能分析等方面都有应用。
大肠杆菌用于表达重组蛋白有以下特点:
易于生长和控制;用于细菌培养的材料不及
哺乳动物细胞系统的材料昂贵;有各种各样的大肠杆菌菌株及与之匹配的具各种特性的质粒可供选择。
但是,在大肠
杆菌中表达的蛋白由于缺少修饰和糖基化、磷酸化等翻译后加工,常形成包涵体而影响表达蛋白的生物学活性及构
象。
表达载体在基因工程中具有十分重要的作用,原核表达载体通常为质粒,典型的表达载体应具有以下几种元件:
(1)选择标志的编码序列;
(2)可控转录的启动子;
(3)转录调控序列(转录终止子,核糖体结合位点);
(4)一个多限制酶切位点接头;
(5)宿主体内自主复制的序列。
原核表达一般程序如下:
获得目的基因-准备表达载体-将目的基因插入表达载体中(测序验证)-转化表达宿主菌-诱导靶蛋白的表达-表
达蛋白的分析-扩增、纯化、进一步检测
一、试剂准备
1、LB培养基。
2、100mMIPTG(异丙基硫代-βμm滤膜抽滤,-20℃保存。
二、操作步骤
(一)获得目的基因
1、通过PCR方法:
以含目的基因的克隆质粒为模板,按基因序列设计一对引物(在上游和下游引物分别引入不同的酶
切位点),PCR循环获得所需基因片段。
2、通过RT-PCR方法:
用TRIzol法从细胞或组织中提取总RNA,以mRNA为模板,逆转录形成cDNA第一链,以逆转录
产物为模板进行PCR循环获得产物。
(二)构建重组表达载体
1、载体酶切:
将表达质粒用限制性内切酶(同引物的酶切位点)进行双酶切,酶切产物行琼脂糖电泳后,用胶回收Kit
或冻融法回收载体大片段。
2、PCR产物双酶切后回收,在T4DNA连接酶作用下连接入载体。
(三)获得含重组表达质粒的表达菌种
1、将连接产物转化大肠杆菌DH5α,根据重组载体的标志(抗Amp或蓝白斑)作筛选,挑取单斑,碱裂解法小量抽提
质粒,双酶切初步鉴定。
2、测序验证目的基因的插入方向及阅读框架均正确,进入下步操作。
否则应筛选更多克隆,重复亚克隆或亚克隆至不同
酶切位点。
3、以此重组质粒DNA转化表达宿主菌的感受态细胞。
(四)诱导表达
1、挑取含重组质粒的菌体单斑至2mlLB(含Amp50μg/ml)中37℃过夜培养。
2、按1∶50比例稀释过夜菌,一般将1ml菌加入到含50mlLB培养基的300ml培养瓶中,37℃震荡培养至OD600≌0.4-1.0(最
好0.6,大约需3hr)。
3、取部分液体作为未诱导的对照组,余下的加入IPTG诱导剂至终浓度0.4mM作为实验组,两组继续37℃震荡培养3hr。
4、分别取菌体1ml,离心12000g×30s收获沉淀,用100μl1%SDS重悬,混匀,70℃10min。
5、离心12000g×
原核表达秘籍:
切记重视表达前分析的重要性
摘要:
生物通原核表达技术专辑:
表达不同于其它一些实验,比如:
提取质粒、PCR、电镜切片,这些人为操纵的因素比较多,出问题相对来讲也比较好分析。
表达呢,你把质粒克隆好啦,交给细胞,然后有些情形就不满是你要如何就如何了。
原核表达在表达当中来讲仍是比较简单,细菌培育条件简单、生长速度快,需要的仪器和培育基都比较廉价。
固然,它也存在一些缺乏高级修饰、细胞内部还原性太高等缺点。
原核表达从一开始的设计就超级重要,所谓好的开始是成功的一半。
做足预备功夫,可是省去很多以后后悔的情形。
第一,咱们要依照是不是要求可溶将载体分成两大类,若是希望能够同时尝试多种表达系统,也有许多商业化的系统供选择。
前面已经介绍过许多公司的商业化载体、菌株和多系统表达体系,此刻我想先从自己的蛋白分析讲起。
一样的载体、一样的系统,极可能表达那个蛋白表达量奇高,可是另外一个确实是做不出来,因此没有全能的载体,只有永久的分析。
固然若是你的蛋白曾经在原核系统中成功表达出来那是最好的,选择一样的载体表达到功率会高很多。
若是没有也最好尝试找一些曾经表达过和你的蛋白拥有相类似结构的文献。
比如大部份含有哺乳动物src同源的SH2蛋白彼此作用域的蛋白都是用pGEX系列载体表达出来的。
依照体会而言,含有较少半胱氨酸和脯氨酸的、平均大小为60kD的单体蛋白较容易表达。
在下面将列出几个阻碍表达的因素,大伙儿能够在表达前依照这几个因素自己分析一下:
1翻译起始位点
2现在大部分的表达载体都提供起始位点,所以它已经把起始密码子与核糖体结合位点的距离进行优化了,一般情况下不需要自己再加,不过还是要留意载体图谱上是否注明有起始密码子和终止密码子
3GC含量
4表达序列中的GC含量超过70%的时候可能会降低蛋白在大肠杆菌中的表达水平。
GC含量可以利用DNASTAR、VectorNTISuite等软件进行预测。
5二级结构
6在起始密码子附近的mRNA二级结构可能会抑制翻译的起始或者造成翻译暂停从而产生不完全的蛋白。
如果利用软件分析DNA或RNA结构上有柄(stem)结构,并且结合长度超过8个碱基,这种结构会因为位点专一突变等因素而变得不稳定。
7基因或蛋白的大小
8一般说来小于5kD或者大于100kD的蛋白都是难以表达的。
蛋白越小,越容易被降解。
在这种情况下可以采取串联表达,在每个表达单位(即单体蛋白)间设计蛋白水解或者是化学断裂位点。
如果蛋白较小,那么加入融合标签GST、Trx、MBP或者其它较大的促进融合的蛋白标签就较有可能使蛋白正确折叠,并以融合形式表达。
9
10对于另一个极端,大于60kD的蛋白建议使用较小的标签,如6×组氨酸标签。
关于结构研究较清楚的蛋白能够采取截取表达。
固然表达时要依照目的进行截取,若是是要进行抗体制备而截取,那么必然要保证截取的部位抗原性较强。
关于抗原性也能够利用软件分析,比如VectorNITSuite或一些在线软件,只是在分析之余也要熟悉到这是一种数据统计的结论,若是蛋白和免疫动物亲缘关系较远的话仍是不妨一试的。
11亲疏水性
12这也是一种经验之谈,相信经常做表达的人都发现表达亲水区域时表达量会比较高,如果你要表达一个膜蛋白,那么劝你做好长期抗战的准备吧。
有许多软件可以对氨基酸的亲疏水性进行分析,比如VectorNITSuite,除此之外还可以利用在线跨膜区预测软件http:
//www.cbs.dtu.dk/services/TMHMM/对跨膜区进行预测。
关于自己表达的蛋白有所了解后就能够够开始对载体进行选择了,目前商业化的载体大体上包括以下几个元件:
除上面标出的元件外还需要有复制起点,它关于操纵质粒的拷贝数超级重要;另外确实是挑选标记了,比如蓝白斑挑选的lacZ,各类抗生素标记。
在以上几个元件中,咱们需要注意的是负责调剂与启动的元件,也确实是调控子和启动子。
其中启动子关于蛋白表达的速度起着举足轻重的作用,它与最终蛋白的表达量、是不是可融密不可分。
那个地址,关于世面上普遍销售的几种原核表达载体利用的启动子进行总结。
启动子
来源
调控手段(浓度)
强度
LacUV5
乳糖操纵元
lacI/IPTG(0.1-1mM)
强
Trp
色氨酸操纵元
trpR3-β-吲哚丙烯酸
强
Tac
结合了色氨酸启动子的-35序列和乳糖启动子的-10序列
lacI/IPTG(0.1-1mM)
强
PL
λ噬菌体
λcI阻遏物/温度
强
噬菌体T5
T5噬菌体
lacI/IPTG(0.1-1mM)
强
pBAD
阿拉伯糖操纵元
AraBAD/阿拉伯糖(1μm-10mM)
严谨
T7
T7RNA聚合酶
lacI/IPTG(0.1-1mM)
非常强
乳糖操纵子是应用最普遍的调控模式,除IPTG这种化学诱导方式之外还有利用吲哚丙烯酸和阿拉伯糖的化学诱导。
若是你可怕这些化学物质会损害细菌的生长,那么你能够尝试利用温度诱导的载体,如:
pDH2。
它利用PL启动子,在温度上升到42℃后进行诱导表达。
能够看到在所有启动子里属T7启动子最强,它能够将大肠杆菌的资源最大程度地挪用过来表达外源蛋白。
如此一些难表达的蛋白都能够在pET系统里面表达出来,可是是不是越强就越好呢?
若是你需要表达蛋白是可溶的,那么T7启动子就不那么适合了。
较弱的启动子转录速度较慢,如此关于表达可溶、稳固、完整的蛋白比较有利。
Novagen能够说是的pET系统是最王牌的T7启动子表达系统,可是当T7启动子的强启动效应不受欢迎的时候如何办呢?
在那个地址给读者留个小小的疑问,看看大伙儿有无认真看笔者写的Novagen篇。
提示一下,尽管它转录速度快,可是能够操纵它的拷贝数,又或是……利用这些原理Novagen载体也能够毒性高的外源蛋白。
载体上除启动子那个需要注意之外,另外一个确实是标签了。
很多标签是为了增加蛋白的可溶性,也有一些是为了方便鉴定表达产物,因此在表达时能够选择加标签。
是不是加标签要看个人需要,笔者以为若是是表达一个人家没表达过的蛋白最好仍是加标签,如此方便以后鉴定。
若是从经济角度考虑最好加入6×组氨酸标签,笔者曾经以为加什么标签都无所谓(前提是不需要融合表达),结果加了个Novagen的T7·Tag,等到鉴定的时候发觉单抗那么贵。
而且还不行买的,一些较少人用的标签会让你很伤脑筋。
这也是表达前要预备的作业之一哦。
好了,若是你选好了载体,那么下一步确实是设计引物的。
相信大多数人都是利用PCR把目的基因调出来的吧。
设计引物能够利用一下两个软件,PrimerPremier或Oligo。
若是要表达全长,其实也就没那么多要考虑,从一头一尾找至少8个匹配序列在加上与载体匹配的序列就能够够了。
只是,我仍是有以下几点提示一以下位:
13这一点其实很容易明白得,可是有时也容易被遗忘。
那确实是先查查表达外源片段中含有什么内切酶位点,不要设计重了,不然酶切时发觉怎么老是有预期外的小片段显现。
14依照载体上的酶切位点设计引物,此刻许多类似T载原理的克隆方式也能够应用到原核表达中了,若是T载克隆方式要定向很多时候要多加4个碱基,设计引物时候可别忘了加。
在设计酶切位点的5’端不要忘了加爱惜碱基,不同内切酶所需的爱惜碱基不同,SalⅠ不需要爱惜碱基,EcoRⅤ需要1个,NotⅠ需要2个,HindⅢ最好有3个。
一样情形下,都设计2个。
15注意启始密码子和终止密码子的读码框。
若是载体上有ATG能够不另外加了,可是通常ATG后不是紧跟外源片段的,若是中间含有载体序列,务必确信中间这段序列可不能造成你外源序列的移码。
按情形需要,能够加1到2个碱基在引物中使读码框正确。
有始有终,一样正常的终止密码子才能保证蛋白的产出。
大部份载体也有终止密码子,若是你对载体的不安心,也能够在引物中设计上终止密码子,如此万无一失。
16还有确实是设计一对引物需要注意的地址:
一对引物之间Tm值相差不宜过大,能一样最好;一对引物不宜形成发夹结构、相互配对,假设配对时最好不若是G-C的结合(能够用软件分析);3'端以G、C结尾为宜等等。
若是要详细研究能够看一下PCR技术的相关书籍,很厚。
还有确实是记得把上游引物设计成有义链,下游设计成反义链,不然就没有片段显现了。
尽管这是很小的地址,可是常常会被忽略。
17若是你是进行截取表达,那么除之前提到的要注意截取亲水区,还有一点确实是对密码子的利用频率进行分析。
若是在大肠杆菌中利用较少的密码子在外源片段中持续显现,仍是躲开它为上策。
18看完这么多是不是觉得有点思绪万千呢。
以前给我上课的一位教授说过,做试验,那要大胆设计,小心求证。
快去合成引物开始表达吧。
万一表达不出来,我这还有下篇呢。
pET载体,原核表达金标准
关于全世界许多研究者,Novagen的pET系统已成为在大肠杆菌中蛋白表达的首选。
该系统成功的一个要紧缘故是目标基因被克隆到不为大肠杆菌RNA聚合酶识别的T7启动子之下,因此在加入T7RNA聚合酶之前几乎没有表达发生。
克隆到pET载体的基因事实上是被关闭的,可不能由于产生的蛋白对细胞有毒性而引发质粒不稳固。
重组质粒转移到染色体上含有一拷贝由lacUV5操纵的T7RNA聚合酶基因的表达宿主中,并通过加入IPTG诱导表达;也可通过lCE6感染原始克隆宿主菌来提供T7RNA聚合酶。
利用大肠杆菌启动子系统(如tac、lac、trc、pL)有困难的许多基因已经在pET系统中稳固克隆和表达。
T7RNA聚合酶的选择性和活性使得几乎所有细胞资源都用于为目标基因表达。
诱导后几小时目标产物就可超过细胞总蛋白的50%。
新开发的T7驱动表达技术以pETBlueTM系统为代表。
pETBlue载体包括了pET用于表达的优点,在目标基因克隆和质粒DNA操作的方面更为方便。
pETBlueTM系统:
新一代T7表达载体
pETBlue载体代表了新型表达载体,它具有所有广受欢迎的克隆载体的最理想特点和T7驱动蛋白表达的完全功能。
目标基因以相关于修饰的大肠杆菌tet启动子的反义方向插到lacZa-肽编码区,因此可进行蓝/白斑挑选。
正确信位于目标基因正义方向上游的T7转录和翻译信号使表达到为可能。
与标准pET载体一样,通过转化λDE3溶原菌并用IPTG诱导或通过lCE6感染原始宿主菌生产目标蛋白。
优势
·蓝/白斑挑选,便于克隆
·高拷贝数,质粒DNA高产
·以AccepTorTM载体或perfectlyBlunta载体形式提供,便于快速PCR克隆
·目标基因无基础水平表达,排除毒性基因产物相关的质粒不稳固性
·表达水平与经典pET载体相同
·用TunerTM(DE3)pLacI宿主菌实现真正的表达水平“变阻器”操纵。
PET系统:
大肠杆菌中蛋白表达的金字招牌
pET载体中,目标基因克隆到T7噬菌体强转录和翻译信号操纵之下,并通过在宿主细胞提供T7RNA聚合酶来诱导表达。
Novagen的pET系统不断扩大,提供了用于表达的新技术和选择,目前共包括36种载体类型、15种不同宿主菌和设计用于有效检测和纯化目标蛋白的许多其它相关产品。
优势
·是原核蛋白表达引用最多的系统
·在任何大肠杆菌表达系统中,基础表达水平最低
·真正的调剂表达水平的“变阻器”操纵
·提供各类不同融合标签和表达系统配置
·可溶性蛋白生产、二硫键形成、蛋白外运和多肽生产等专用载体和宿主菌
·许多载体以LIC载体试剂盒提供,用于迅速定向克隆PCR产物
·许多宿主菌株以感受态细胞形式提供,可当即用于转化
阳性pFORCETM克隆系统具有高效克隆PCR产物、阳性选择重组体和高水平表达目标蛋白等特点。
pETBlueTM系统
T7驱动的严紧操纵表达、蓝/白斑挑选、质粒产量高
新颖的pETBlueTM系统兼有广受欢迎的蓝/白斑挑选载体所具有的通过目测确信重组体和高质粒拷贝数,和pET载体严紧操纵的高蛋白表达等特点。
蓝/白斑挑选通过利用弱组成型大肠杆菌启动子(tet)驱动lacZa-肽表达而实现,而目标基因表达由相反方向的T7启动子驱动。
目标序列插入多克隆位点(MCS)破坏了lacZa-肽的表达,在NovaBlue菌株中当存在x-gal时产生白菌落表型,而带有非重组载体的菌落变蓝。
由于T7驱动的蛋白表达要求插入片段克隆到相关于tet启动子的反义方向,因此事实上没有目标序列的基础表达。
相关于pET载体,pETBlue质粒上高拷贝PUC复制起点增加了质粒产量,为测序、突变和其它质粒操作带来方便。
若是插入序列相关于T7lac启动子为正义方向且符合每一个载体的翻译要求,pETBlue载体中目标基因能够高水平表达。
用两种方式进行蛋白表达:
用lCE6(lpL启动子操纵T7RNA聚合酶表达的噬菌体)感染,或转化重组pETBlue质粒到宿主菌TunerTM(DE3)pLacI或OrigamiTM(DE3)pLacI中并用IPTG诱导。
这些宿主菌染色体上带有一拷贝lacUV5操纵的T7RNA聚合酶基因,并通过相容的pLacI质粒提供足够lac阻遏蛋白,以确保低水平的未诱导表达。
Tuner菌株的lacY状态使整个培育细胞被均一的诱导,并随IPTG剂量诱导有不同的蛋白表达水平。
Origami菌株能够增强胞质中二硫键形成。
pETBlue-1
pETBlue-1便于从5'端编码开放读码框架的插入片段表达未融合的天然蛋白。
该载体EcoRV(GATATC)克隆位点位于强T7基因10核糖体结合位点(RBS)周围。
含有ATG起始密码子或5'端具有一个位置适合的G核苷酸插入片段成为一个适合的大肠杆菌翻译起始位点。
pETBlue-2
pETBlue-2提供了载体编码的ATG起始密码子和多种下游克隆位点。
MCS5'和3'端两套各三个重叠平结尾酶切位点便于将任何插入片段克隆到读码框中。
在载体确信的读码框中,这些酶产生的平结尾终止于密码三联体的不同位置。
因此只要插入方向正确,任何插入片段可克隆到通过适合平结尾酶切割的载体的读码框中。
而且,任何不含内部终止密码子的插入片段都可与C-结尾HSV.Taga表位和His.Taga序列克隆到同一读码框中。
pETBlueTMPCR克隆试剂盒
方便地将PCR扩增DNA直接克隆到pETBlue载体中
除含有未切割质粒的pETBlueTM系统,Novagen还提供可当即插入PCR产物的pETBlue载体。
已有两种试剂盒:
AccepTorTM载体试剂盒能够插入带单个3'-dA突出的DNA,如非校对DNA聚合酶(如TaqDNA聚合酶)的扩增产物;而perfectlyBlunta克隆试剂盒设计用于克隆任何结尾形式的插入片段。
在pETBlue-1AccepTor载体中表达插入基因的引物设计:
pETBlue-1:
用5'端ATG开始的正义引物进行扩增,能够确保在大肠杆菌中有效合成蛋白的RBS和翻译起始位点之间的最适距离。
目标序列羧基端引物设计没有限制。
Met---
正义引物5'-ATGXXX---
反义引物无限制
pET系统概述
pET系统是在大肠杆菌中克隆和表达重组蛋白的最壮大系统。
依照最初由Studier等开发的T7启动子驱动系统,Novagen的pET系统已用于表达到千上万种不同蛋白。
操纵基础表达水平
pET系统提供6种载体-宿主菌组合,能够调剂基础表达水平以优化目标基因的表达。
没有单一
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