GPC操作步骤Word下载.docx
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GPC操作步骤Word下载.docx
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超声15min,恢复到室温后才可利用。
2.分析操作步骤
2.1.开机及平稳进程
2.1.1.打开空调,使室内温度维持在25℃左右。
2.1.2.打开电脑及仪器(包括输液泵LC-20AD、自动进样器SIL-20A、检测器RID-10A、柱温箱CTO-20A)。
在打开仪器的时候,通常操纵器最后开。
若是操纵器装在输液泵内部,那么该输液泵最后开。
2.1.3.运行LCsolution。
双击电脑桌面
,打开LCsolution程序,点击第一个图标。
Login窗口点击OK,无密码。
2.1.4.点击“InstrumentParametersView”中“Normal”,设定方式参数。
仪器参数窗口设定方式参数:
流动相流速(pumpaflow):
1ml/min
测按时刻(time):
大于溶剂峰出峰时刻2-3min
柱温(oventemperature):
40℃(与检测器温度相同)
选中Advanced窗口,pump,pressure:
max:
8mPa(参照柱子说明书,两根柱子串联那么相加)
点击Download按钮,显现对话框选择是,将参数下载到仪器。
“InstrumentParametersView”中“Advanced”为各设备的运行参数,参考相关说明书制定。
2.1.5.输液泵排气:
逆时针拧开LC-20AD排液阀,按purge按钮,3min后自动终止,顺时针拧紧排气阀。
排液阀拧开不要超过180度,不然反而容易在purge时引入气泡。
2.1.6.进样器冲洗:
按自动进样器上purge按钮,25min后自动终止;
自动进样器清洗液利用与流动相相同溶剂,可是去除添加的盐和酸等物质。
2.1.7.平稳GPC柱:
待终止后,按(InstrumentOn/Off)使仪器依照方式参数开始运转,一样60min左右基线能够走平。
能够与步同时进行。
2.1.8.示差检测器平稳
2.1.8.1.按Rflowon/off键冲洗参比池。
2.1.8.2.20min后,按Rflowon/off键停止冲洗,反复点击3-4次以排除池内气泡。
2.1.8.3.调零,等基线平稳后检查balance值,若是大于50,就进行光路平稳,若是小于50,没必要进行。
2.1.8.4.在仪器监视窗口查看检测器能量应处于6000和9000之间,不然在面板上调剂电压使之座落在该范围内。
能够在步流动相完全置换色谱柱中溶液后开始进行。
2.1.9.待基线大体稳固,按ZerosDetectorA键调零。
2.2.分析操作进程
2.2.1.放入样品瓶,记录放置孔号。
样品架应推倒底,瓶垫应该白色朝上。
2.2.2.编辑批处置表
2.2.2.1.右边助手烂点击“Batchprocessing”
2.2.2.2.New;
2.2.2.3.输入第一个样品进样器孔号(Vial#),右键filldetail;
2.2.2.4.跳出窗口中依次填入行数(由第1行到第6行)、第一个样品孔号
(2)与重复次数(1次);
点击“OK”;
2.2.2.5.依次输入samplename(样品名)、sampleID(样品编号);
2.2.2.6.methodfile列中输入方式文件(*.lcm文件),左键选定列,右键单击,选择filldown向下填充;
2.2.2.7.确信数据文件保留地址及名称;
2.2.2.8.输入进样体积:
50μl-100μl(标样浓度高则进样量少,低那么进样量多;
所有的标准品和代测样品应该采纳相同的进样体积);
2.2.2.9.保留批处置文件。
2.2.3.运行批处置表。
点击Batchstart按钮,开始进样。
测试进程中可按助手栏中“Pause”暂停,插入样品后保留批处置表,按restart;
也可按“Stop”停止,对话框弹出选择“停止这一针分析”和“停止那个样品表的分析”。
手动进样器点击singlestart进行单次进样。
2.3.分析完冲洗及关机进程
2.3.1.第二天将会再次利用
2.3.1.1.点击仪器操纵栏图标,停止温控。
2.3.1.2.使流动相以min流速流入填充柱,直至柱温冷却至室温;
2.3.1.3.点击“intrumenton/off”
2.3.1.4.依次关闭程序、电脑和仪器。
2.3.2.仪器长时刻不用
2.3.2.1.点击仪器操纵栏图标,停止温控。
2.3.2.2.换上保留溶剂,以min流速流入填充柱,时刻为3-4倍方式时刻,直至柱温冷却至室温;
2.3.2.3.点击“intrumenton/off”
2.3.2.4.将填充柱从仪器上拆下,两头用堵头堵住,放置在包装盒中。
2.3.2.5.依次关闭程序、电脑和仪器。
柱子的利用和保藏应该依照柱子利用说明书来操作。
改换溶剂时注意缓冲盐不要析出和溶剂之间的互溶性。
3.分子量计算进程
以sample目录下的演示文件为例介绍分子量校正曲线制作及操作进程。
3.1.校正曲线制作
第一双击桌面LCsolution图标,单击GPCPostrun,打开GPCPostrunAnalysis窗口。
所有的操作均在该窗口中进行。
1.双击数据资源治理器窗口GPC_Data-001文件,打开GPC标准品数据文件。
(001,002,003,004均为分子量标准品数据文件,每一个标准品数据文件中含有两个不同分子量的标准品,因此有两个峰。
005为未知品数据文件)
2.单击工具栏DataAnalysisParameters图标
显现DataAnalysisParameters窗口,利用如下图的积分参数。
单击DataAnalysisParameters窗口中的Program图标。
设定积分时刻程序,确保只有标准品的峰被积分出来。
通常将溶剂峰开始时刻20min输入Time列,在Command列当选择IntegrationOff,如此溶剂峰就不被积分。
设好后单击OK按钮。
单击DataAnalysisParameters窗口的Advanced按钮。
设定为5000,单击OK按钮。
单击确信。
3.单击助手栏ApplytoMethod按钮。
给方式文件取个名字GPC_test,单击保留按钮。
显现SelectMethodParameters窗口,直接单击OK按钮。
单击如下图的按钮,关闭GPC_Data-001数据文件。
提示是不是保留数据文件,选择是。
4.单击数据资源治理器窗口Method标签,显示方式文件。
双击适才保留的GPC_test方式文件,显现方式文件编辑窗口。
5.窗口中显示了以前的分子量校准曲线信息,先将以前的信息清除掉。
(若是没有以前的信息,跳过这一步)单击校准表查看窗口Edit按钮,切换到编辑模式。
选中所有列,鼠标右键单击,选择DeleteRow,删除所有行。
单击View按钮,切换到查看模式。
显现对话框,直接单击确信。
如此就将以前的信息清除掉了。
6.单击工具栏DataAnalysisParameters图标。
显现数据分析参数编辑窗口,选择Curve类型为三次方曲线。
单击GPCCalculation标签。
采纳窄散布校正法时,在上图QFactor一栏输入RQF值(Q因子比)。
采纳普适校正法时,在上图Viscosity栏中输入标样的α和K值。
并点击CalibrationCurve标签,选中Mark-Houwink,点击settings,输入样品的α和K值。
将GPCCalculation选项打勾。
显现窗口,直接单击确信。
7.单击ChromatogramView窗口的Multiview标签,切换到显示多色谱图界面。
单击DataExplorerer窗口的Data标签,显示所有的数据文件。
选中001-004这四个数据文件。
将选中的四个数据文件拖到MultiView窗口中,同时显示四个色谱图的八个峰。
8.单击校准表查看窗口的Edit按钮,切换到编辑模式。
单击校准表查看窗口右下角的Pickup按钮。
显现GPCMethodEdit窗口,单击Allpeaks按钮选择所有积分出来的峰。
单击New按钮,新建校准表。
校准表中显现所有峰的保留时刻,检查确认是不是正确。
输入各个峰所对应的分子量。
单击View按钮。
CalibrationCurveView显现制作好的校准曲线图谱和方程。
9.单击工具栏Save按钮,保留方式文件。
显现对话框,单击是。
3.2.样品平均分子量计算
1.双击打开未知品数据文件GPC_Data-005。
单击Method标签。
将适才保留的GPC_test方式拖到右边的色谱图窗口中,加载方式参数。
显现选择方式参数对话框,直接单击OK。
2.单击工具栏MolecularWeightDistribution按钮。
查看分子量计算结果。
3.单击助手栏DataReport按钮查看数据文件中的报告。
显示包括在数据文件中的报告。
单击File菜单,打开报告格式文件,能够修改报告格式。
选择CalculationResults目录。
(该目录中寄存的都是针对单个GPC数据文件的报告模板)
选择如下图的报告格式文件。
(共有四种不同格式的报告格式文件可供选择)
单击助手栏Preview按钮。
在打印前预览报告。
单击打印按钮,就能够够打印出报告。
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