细胞及遗传学实验.doc
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细胞及遗传学实验
目录
实验一细胞膜的渗透性………………………………1
实验二细胞凝集反应……………………………........2
实验三巨噬细胞吞噬现象的观察……………………3
实验四线粒体和液泡系的超活染色与观察…………6
实验五DNA的Feulgen染色法..................10
实验六动物染色体标本的制备与观察………………12
实验七植物染色体标本的制备与观察………………15
实验八联会复合体的染色与观察................17
实验九果蝇的形态和生活史观察………………….....18
实验十果蝇唾腺染色体标本的制备与观察………….21
实验十一人体X~染色质(巴尔小体)的观察.......22
实验十二人体外周血细胞培养及染色体制备和观察….24
实验一细胞膜的渗透性
实验目的
了解细胞膜的渗透性及各种物质进入细胞的速度。
实验原理
将红细胞放入数种等渗溶液中,由于红细胞对各种溶质的透性不同,有的溶质可以渗入,有的溶质不能渗入,渗入的溶质能够提高红细胞的渗透压,所以促使水分进入细胞,引起溶血。
由于溶质透入速度互不相同。
实验用品
一、器材
50ml小烧杯,10ml移液管,试管(1~10ml),试管架。
二、氯化试剂
0.17mol/L氯化钠、0.17mol/L氯化铵、0.17mol/L醋酸胺、0.17mol/L硝酸钠、0.12mol/L草酸铵、0.12mol/L硫酸钠、0.32mol/L葡萄糖、0.32mol/L甘油、0.32mol/L乙醇、0.32mol/L丙酮。
三、材料
兔血。
实验方法
一、兔血细胞悬液
取50ml小烧杯一只,加1份兔血和10份0.17mol/L氯化钠溶液,形成一种不透明的红色液体,此即稀释的兔血。
二、低渗溶液
取试管一支,加入10ml蒸馏水,再加入1ml稀释的兔血,注意观察溶液颜色的变化,由不透明的红色逐渐澄清,说明红细胞发生破裂造成100%红细胞溶血,使光线比较容易透过溶液。
三、兔红细胞的渗透性
1.取试管一支,加入0.17mol/L氯化钠溶液10ml,再加入1ml稀释的兔血,轻轻摇动,注意颜色有无变化?
有无溶血现象?
为什么?
2.取试管一支,加入0.17mol/L氯化铵溶液10ml,再加入1ml稀释的兔血,轻轻摇动,注意颜色有无变化?
有无溶血现象?
若发生溶血,记下时间(自加入稀释兔血到溶液变成红色透明澄清所需时间)。
3.分别在另外8种等渗溶液中进行同样实验。
步骤同2。
实验结果
将观察到的现象列入表6-1,对实验结果进行比较和分析。
表6-1不同低渗溶液下的溶血现象
试管编号
是否溶血
时间
结果分析
1.10ml氯化钠+1ml稀释兔血
2.10ml氯化铵+1ml稀释兔血
3.10ml醋酸胺+1ml稀释兔血
4.10ml硝酸钠+1ml稀释兔血
5.10ml草酸铵+1ml稀释兔血
6.10ml硫酸钠+1ml稀释兔血
7.10ml葡萄糖+1ml稀释兔血
8.10ml甘油+1ml稀释兔血
9.10ml乙醇+1ml稀释兔血
10.10ml丙酮+1ml稀释兔血
实验二细胞凝集反应
实验原理
细胞膜是双层脂镶嵌蛋白质结构,脂和蛋白质又能与糖分子结合为细胞表面的分支状糖外被。
目前认为:
细胞间的联系,细胞的生长和分化,免疫反应和肿瘤发生都和细胞表面的分支状糖分子有关。
凝集素(lectin)是一类含糖的(少数例外)并能与糖专一结合的蛋白质,它具有凝集细胞和刺激细胞分裂的作用。
凝集素使细胞凝集是由于它与细胞表面的糖分子连接,在细胞间形成“桥”的结果,加入与凝集素互补的糖可以抑制细胞的凝集。
实验用品
1.土豆块茎。
2.显微镜、粗天平、载玻片、滴管2支、离心管2支。
3.PBS缓冲液
称取NaCl7.2g、Na2HPO40.43g、加蒸馏水,定容至1000ml,调PH值到7.2.
4.2%的红细胞
以无菌方法抽取兔子静脉血液(加抗凝剂),用生理盐水洗5次,每次2000r/min,离心5min,最后按压积红细胞体积用生理盐水配成2%红细胞液。
实验方法
1.称取土豆去皮块茎2g,加10mlPBS缓冲液,浸泡2h,浸出的粗提液中含有可溶性土豆凝集素。
2.用滴管吸取土豆凝集素和2%红细胞液各一滴,置载玻片上,充分混匀,精致20min后于低倍显微镜下观察血球凝集现象。
3.以PBS液加2%血细胞液作对照试验。
作业
简图表示血细胞凝集原理
实验三巨噬细胞吞噬现象的观察
实验目的
一、观察巨噬细胞吞噬全过程和意义。
二、掌握小鼠腹腔注射给药和颈椎脱臼处死方法。
实验原理
细胞吞噬作用原来是单体细胞动物摄取营养物质的方式,也是原始防御作用。
随着动物界的进化,在高等动物中,则发展生成大小两类吞噬细胞(即巨噬细胞和嗜中性粒细胞),专司吞噬作用,成为非特异免疫功能的重要组成部分。
巨噬细胞由骨髓干细胞分化生成,然后进入血液到达各组织内,并进一步分化为各种巨噬细胞。
当病原微生物或其他异物侵入机体时,能招引巨噬细胞,而巨噬细胞又有趋化性,能响应招引因子的招引,产生活跃的变形运动,主动向病原体或异物移行,在接触到病原体或异物时,即伸出伪足将之包围并内吞入细胞,形成吞嗜体,继而细胞质中的初级溶酶体与吞噬泡发生融合形成吞噬性溶酶体,通过其中水解酶作用下,将病原体杀死,消化分解,最后将不能消化的残渣排除细胞外。
实验用品
一、器材
显微镜,解剖盘,剪刀,镊子,载玻片,盖玻片,注射器,吸管,吸水纸
二、试剂
1、0.85%生理盐水(0.85g氯化钠溶于100ml蒸馏水中)
2、alsever溶液
葡萄糖2.05g
柠檬酸钠0.89g
柠檬酸0.05g
氯化钠0.42g
蒸馏水100ml
调ph至7.2,过滤灭菌或高压灭菌10分钟,置4摄氏度冰箱保存
0.4%台盼蓝染液(台盼蓝染粉0.4g,0.85%生理盐水)
4.0%淀粉肉汤(含台盼蓝染液)
牛肉膏0.3g
蛋白胨1.0g
氯化钠0.5g
蒸馏水100ml
加热后加入可溶性淀粉6.0g,促使溶解,再煮沸灭菌,置4摄氏度冰箱保存。
用时水浴融化,加入适量台盼蓝染液混匀,使呈蓝色。
三、材料
1、小白鼠
2、1%鸡红细胞悬液。
自健康鸡翼静脉采学1ml,放入盛有4mlalsever溶液瓶中,混匀置4摄氏度冰箱保存备用。
使用前加入0.85%生理盐水离心(1500r/min10min)洗涤两次,再用生理盐水配成1%浓度悬液。
实验方法
一、在实验前一天,给小白鼠腹腔注射6%淀粉肉汤(含台盼蓝)1ml。
注射时,先用右手抓住鼠尾提起,放在实验台上,用左手的拇指食指抓住小鼠两耳和头颈皮肤,将鼠体置于左手心中,把后肢拉直,用左手的无名指和小指按住尾与后肢,前肢可用中指固定,即可在腹部后1/2处的一侧注射,进针勿过深,否则易损害肝及血管等,造成出血致死。
二、实验时,每组去一只注射过淀粉肉汤的小白鼠,腹腔注射1%鸡红细胞悬液1ml,轻按小白鼠腹部,使悬液分散。
三、20min后,用颈椎脱臼法处死小鼠(右手抓住鼠尾,用力向后拉,左手拇指与食指同时向下按住鼠头,使脊髓与脑髓间断开致使鼠死亡)
四、将小鼠置于解剖盘中,剪开腹部,把内脏推向一侧,用不装针头的注射器或吸管吸取腹腔液。
五、每人取一张干净载玻片,滴一滴腹腔液,盖上盖玻片,置显微镜下观察。
实验结果
调节集光气使显微镜视野中光线稍暗些。
在高倍镜下,先分辨清鸡红细胞和巨噬细胞。
鸡红细胞是一些淡黄色、椭圆形有核的细胞;而数量较多,较大的圆形形或不规则的细胞,其表面具有许多似刺毛状的小突起(伪足),胞质中含有数量不等的蓝色颗粒(为吞入的含台盼蓝的淀粉肉汤形成的巨噬体),即为巨噬细胞。
慢慢移动玻片标本,仔细观察巨噬细胞吞噬鸡红细胞的过程。
可见的鸡红细胞(1~多个)紧缚于巨噬细胞表面;有的巨噬细胞已经将1~数个红细胞部分吞入;有的巨噬细胞已吞入1个或几个红细胞在胞质中刚形成椭圆形的吞噬体;有的巨噬细胞内的吞噬泡体积缩小,并呈圆形,这是已经与初级溶酶体发生融合,泡内物正在被消化分解,将直接所观察到的处在不同吞噬阶段的巨噬细胞形态,动态的连贯起来,想一想吞噬作用的全过程。
作业
在高倍镜下绘出在不同吞噬阶段的巨噬细胞图各一个(如鸡红细胞附于巨噬细胞表面、部分吞入红细胞、吞入后形成吞噬体和吞噬体已开始被消化分解等),示吞噬作用的过程。
思考题
一、实验前一天,给小白鼠腹腔注射含台盼蓝淀粉肉汤的目的是什么?
二、巨噬细胞内有哪几种结构对执行复杂的吞噬功能最为重要?
实验四线粒体和液泡系的超活染色与观察
实验目的
一、观察动、植物活细胞内线粒体、液泡系的形态、数量与分布。
二、学习一些细胞器的超活染色技术。
实验原理
活体染色是指对生活有机体的细胞或组织能着色但又无毒害的一种染色方法。
它的目的是显示生活细胞内的某些结构,而不影响细胞的生命活动和产生任何物理、化学变化以致引起细胞的死亡。
活染技术可用来研究生活状态下的细胞形态结构和生理、病理状态。
根据所用染色剂的性质和染色方法的不同,通常把活体染色分为体内活染与体外活染两类。
体内活染是以胶体状的染料溶液注入动、植物体内,染料的胶粒固定、堆积在细胞内某些特殊结构里,达到易于识别的目的。
体外活染又称超活染色,它是由活的动、植物分离出部分细胞或组织小块,以染料溶液浸染,染料被选择固定在活细胞的某种结构上而显色。
活体染料之所以能固定、堆积在细胞内某些特殊的部位,主要是染料的“电化学”特性起重要作用。
碱性染料的胶粒表面带阳离子,酸性染料的胶粒表面带阴离子,而被染的部分本身也是具有阴离子或阳离子的,这样,它们彼此之间就发生了吸引作用。
但不是任何染料皆可以作为活体染色剂之用,应选择那些对细胞无毒性或毒性极小的染料,而且总是要配成稀淡的溶液来使用。
一般是以碱性染料最为适用,可能因为它们具有溶解在类脂质(如卵磷脂、胆固醇等)的特性,易于被细胞吸收。
詹纳斯绿B(JanusgreenB)和中性红(neutralred)两种碱性染料是活体染色剂中最重要的染料,对于线粒体和液泡系的染色各有专一性。
实验用品
一、器材:
显微镜、恒温水浴锅、解剖盘、剪刀、镊子、双面刀片、载玻片、凹面载玻片、盖玻片、表面皿、吸管、牙签、吸水纸(或卫生纸)等。
二、试剂:
1、Ringer溶液(装入滴瓶):
氯化钠0·85g(变温动物用0·65g)、
氯化钾0·25g、
氯化钙0·03g、
蒸馏水100ml。
2、1%、1/3000中性红溶液(装入棕色滴瓶):
称取0·5g中性红溶于50mlRinger液,稍加热(30-40℃)使之很快溶解,用滤纸过滤,装于棕色瓶于暗处保存,否则易氧化沉淀,失去染色能力。
临用前,取已配制的1%中性红溶液1ml,加入29mlRinger溶液混匀,装入棕色瓶
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- 细胞 遗传学 实验