二苯乙烯苷对SAMP8鼠脑组织胆碱能及单胺类神经递质的影响Word格式文档下载.docx
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单胺类神经递质
【Abstract】ObjectiveToobservetheeffectofTSGoncholinergicneurotransmitterandmonoamineneurotransmittercontentsinSAMP8mice'
sbrain.Methods50miceof6month'
soldwithSAMP8wererandomizeddividedto5groups(10ineachgroup):
SAMP8group,huperzineAcontrolgroup,low,midandhighdosegroupsofTSG.Another10micewereassignedtonormalcontrolgroup.Aftermedicationfor50days,theactivityofChAT,AchEinmice'
sbrainineachgroupweredetectedbyspectrophotometry.TheNE,DAand5HTcontentsinbrainweredetectedbyHPLC.ResultsTheactivityofChATdecreasedandtheactivityofAchEenhancedsignificantly,andtheNE,DAand5HTcontentsdecreasedsignificantlyinSAMP8mice'
sbraincomparingwithnormalgroup(P<0.05or0.01).InTSGtreatmentgroup,theactivityofChATenhancedandtheactivityofAchEdecreasedsignificantly,andtheNE,DAand5HTcontentsincreasedsignificantlyinmice'
sbraincomparingwithSAMP8group(P<0.05or0.01).ConclusionTSGcaneffectivelypromotethesynthesisofacetylcholineandreducethedecompositionofacetylcholine,promotethesynthesisofmonoamineneurotransmitter,resultinginthesatisfactoryantidementiaeffects.
【Keywords】2,3,5,4′tetrahydroxystilbene2OβDglycoside(TSG);
alzheimerdisease;
cholinergicneurotransmitter;
monoamineneurotransmitter
阿尔茨海默病,即老年性痴呆(alzheimereisease,AD)是危害老年人身心健康的常见病、多发病。
目前该病的发病机制尚未明确,研究发现AD与脑内多种神经递质密切相关[1,2]。
二苯乙烯苷(2,3,5,4'
四羟基二苯乙烯βD葡萄糖苷,TSG)是何首乌中的主要水溶性成分,近年来发现其具有神经保护作用,对老年性痴呆的防治具有很好的应用价值[3,4]。
本实验从何首乌提取TSG成分,以SAMP8(senescenceacceleratedmouseprone/8,快速老化小白鼠)为老年性痴呆动物模型,考察二苯乙烯苷对SAMP8鼠脑组织胆碱能及单胺类神经递质的影响,报道如下。
材料和方法
1.动物
SAMP8和SAMR1(senescenceacceleratedresistantmouse/1,正常老化小白鼠)雄性小鼠由天津中医学院第一附属医院提供(实验动物质量合格证号:
WJ津实动质M准字第006号),SPF级,体重24~28g。
2.主要试剂
ChAT(胆碱乙酰转移酶)、AchE(乙酰胆碱酯酶)、T.P(总蛋白)测试盒由南京建成生物工程研究所提供。
标准品:
去甲肾上腺素(NE)、多巴胺(DA)、5羟色胺(5HT)标准品(Sigma公司生产);
流动相:
甲醇、乙腈(天津市四友精细化学有限公司生产,批号:
Q/SHIELD0022000);
磷酸氢二钠(广东合山化工厂生产,批号:
20060801);
样品前处理试剂:
高氯酸(广东爱廉化试剂有限公司生产,批号:
060508);
阳性对照药:
石杉碱甲(豫中制药厂生产,批号:
H10940156);
二苯乙烯苷(由右江民族医学院生化教研室根据有关文献[5,6]提取,纯度为73%)。
3.实验仪器
TU1800SPC紫外可见分光光度计(北京普析通用仪器有限责任公司);
RA50半自动化分析仪(BayerDiagnosticsMfg.Ltd);
FJ200高速分散匀质机(上海标本模型厂);
Waters1525高效液相荧光检测器(美国Waters公司);
C18(4.6×
250 mm,5 μm)色谱柱(Agilent公司);
高速冷冻离心机(德国Eppendorf公司)。
4.方法
(1)动物分组与给药
选择6月龄SAMP8雄性鼠50只,随机分为SAMP8对照组、阳性药石杉碱甲对照组、TSG低剂量组、TSG中剂量组、TSG高剂量组,每组10只。
另外选择6月龄SAMR1雄性鼠10只,作为SAMRl对照组。
各组均按0.2ml/10g体重给药。
SAMP8对照组、SAMRl对照组:
生理盐水,30 ml·
kg-1;
阳性药对照组:
石杉碱甲0.02mg·
TSG低剂量组:
TSG0.033g·
TSG中剂量组:
TSG0.1g·
TSG高剂量:
TSG0.3g·
kg-1。
以上各组每日灌胃给药l次,连续50天。
(2)标本采集
第50天给药1小时后处死小鼠,同时迅速剥离小鼠脑组织于4℃预冷的生理盐水漂洗除去血液,用滤纸吸干多余水分,分离左右半脑并分别称重,左半脑用于ChAT、AchE、T.P测定,右半脑用于NE、DA、5HT测定。
(3)ChAT、AchE、T.P的测定
分取出各组小鼠左半脑,分别加入9倍体积的冰生理盐水,用高速分散匀质机制成10%的脑匀浆,3000r·
min-1离心10min,取上清液待测。
按试剂盒操作说明分别对各组小鼠脑匀浆上清液进行ChAT、AchE、T.P测定。
各组小鼠ChAT、AchE活性除以相应的T.P含量作为ChAT、AchE的单位。
(4)单胺类神经递质标准曲线的制备
精密称取NE、DA、5HT标准样品各0.01mg,分别用流动相定容于5ml容量瓶中,制成0.002g·
L1的NE、DA、5HT的贮存液。
按需要稀释成各种浓度进样,每次进样20μl,以进样浓度(X,μg·
L-1)对峰面积(Y)进行线性回归。
(5)单胺类神经递质测定方法
取出各组小鼠右半脑,分别加入9倍量(重量/体积比)5%HClO4,超声粉碎成10%匀浆,冷冻高速离心14000r·
min-115分钟,取上清液进样20μl。
记录各样品的峰面积,代入相应标准曲线计算出相应浓度,统计结果。
色谱条件:
色谱柱为WaterssymmetryC18(4.6×
250 mm,5 μm);
流动相A:
磷酸盐缓冲液;
流动相B:
甲醇;
时间与流速:
0~10min0.5ml·
min-1,10~14min1.0 ml·
min-1,14~22.5min1.5ml·
min-1,22.5~30min0.5ml·
min-1;
A和B泵的比例:
90∶10;
AUFS:
0.01;
波长:
激发波长254nm,发射波长338nm;
柱温:
35℃。
5.统计学处理
采用SPSS11.0统计软件包统计分析,计量资料以均数±
标准差(-±
s)表示,组间比较采用两独立样本t检验,P<0.05为差异有统计学意义。
结果
1.二苯乙烯苷对ChAT和AchE活性的影响与SAMR1对照组相比,SAMP8对照组ChAT活性明显降低,AchE活性明显升高(P<0.05)。
与SAMP8对照组相比,TSG中、高剂量组ChAT活性显著升高,TSG各剂量组AchE活性显著降低(P<0.05或0.01)。
与阳性药对照组比较,TSG各剂量组无显著性差异(P>0.05)。
见表1。
表1二苯乙烯苷对ChAT和AchE活性的影响(略)注:
与SAMR1对照组比较,ΔP<0.05;
与SAMP8对照组比较,▲P<0.05,▲▲P<0.01。
2.NE、DA、5HT含量的标准曲线制备
根据标准曲线求得其回归方程为:
Y=515.6X-38171.9,Y=329.3X-34557.2和Y=342.4X+534.5;
线性范围分别125~2000μg·
L-1,125~4000μg·
L-1和10~500μg·
L-1。
3.二苯乙烯苷对三种单胺类神经递质含量的影响
与SAMR1对照组和阳性药对照组相比,SAMP8对照组动物NE、DA、5HT含量水平明显下降(P<0.05或0.01)。
与SAMP8对照组相比,二苯乙烯苷各剂量组能明显升高NE、DA、5HT水平(P<0.05或0.01),其中以高剂量组作用更明显(P<0.01)。
见表2。
表2二苯乙烯苷对三种单胺类神经递质含量的影响(略)注:
与SAMR1组比较,ΔP<0.05,ΔΔP<0.01;
与SAMP8组比较,▲P<0.05,▲▲P<0.01。
讨论
AD是一种以认知功能下降为特征的神经退行性病变,累及多种神经递质系统,其中胆碱能系统活性下降是引起AD痴呆表现的重要原因之一。
研究表明,AD脑内隔区、Meynert基底核等部位的胆碱能神经元明显减少,AD患者脑内乙酰胆碱(Ach)合成分泌减少,其合成酶ChAT活性下降,且与痴呆严重程度密切相关[7,8]。
AchE是催化Ach水解的主要生物酶,研究证实AD脑内一方面正常神经元内AchE活性降低,另一方面,神经纤维缠结(NFT)和老年斑(SP)内游离于神经元外的AchE活性显著提高,它们
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- 关 键 词:
- 苯乙烯 SAMP8 组织 胆碱能 单胺类 神经 影响