免疫组化课件PPT格式课件下载.ppt
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中心实验室李三华特点特点优点优点优点优点特异性强,定位准;
特异性强,定位准;
结果直观;
形态学改变与功能和代谢相结合;
组织标本可用石蜡保存进性回顾性研究。
缺点缺点缺点缺点步骤多,影响实验成败的因素多;
步骤多,影响实验成败的因素多;
以定位以定位以定位以定位、定性和半定量研究为主,绝对定量定性和半定量研究为主,绝对定量定性和半定量研究为主,绝对定量定性和半定量研究为主,绝对定量分析尚需标准化。
分析尚需标准化。
中心实验室李三华二二免疫组化技术的基本步骤免疫组化技术的基本步骤1.1.制片制片组织切片组织切片组织切片组织切片(石蜡切片石蜡切片石蜡切片石蜡切片、冰冻切片冰冻切片冰冻切片冰冻切片)细胞爬片细胞爬片细胞爬片细胞爬片组织印片组织印片组织印片组织印片血液涂片血液涂片血液涂片血液涂片2.2.抗原抗体反应标记物的显色(反应)抗原抗体反应标记物的显色(反应)3.3.指标检测分析指标检测分析采集图像数据测量结果分析采集图像数据测量结果分析中心实验室李三华石蜡切片细胞爬片中心实验室李三华三三免疫组化的分类免疫组化的分类(11)根据标记物的性质)根据标记物的性质必要性:
组织细胞内必要性:
组织细胞内AgAgAbAb结合反结合反应一般是不可见的,若在镜下检测,应一般是不可见的,若在镜下检测,则必须具有颜色的标记物。
则必须具有颜色的标记物。
中心实验室李三华酶酶原理:
基于酶与底物发生反应并产生原理:
基于酶与底物发生反应并产生不溶性不溶性有色有色产物。
产物。
特点:
不需要特殊的显微镜;
染色后的标本可长期保存;
可以进行复染,使形态更明确;
可根据酶和底物的不同而显示不同的颜可根据酶和底物的不同而显示不同的颜色,易进行双重或多重染色。
色,易进行双重或多重染色。
中心实验室李三华常用酶常用酶辣根过氧化物酶辣根过氧化物酶(HorseradiseHorseradiseperoaidaseperoaidase,HRP)HRP)底物:
底物:
DAB(DAB(四盐酸二氨基联苯胺四盐酸二氨基联苯胺),产物为,产物为棕褐色棕褐色。
碱性磷酸酶碱性磷酸酶(AlkatineAlkatinephasphotasephasphotase,AP,AP)底物:
NBTNBT(四氮唑蓝),产物为(四氮唑蓝),产物为紫蓝色紫蓝色。
葡萄糖氧化酶葡萄糖氧化酶(glucoseoxdase,GODglucoseoxdase,GOD)底物:
葡萄糖,产物为底物:
葡萄糖,产物为蓝色蓝色。
注意:
DABDAB有潜在的致突变作用有潜在的致突变作用中心实验室李三华荧光素荧光素原理:
吸收特定范围波长的光而激发原理:
吸收特定范围波长的光而激发其自身发出另一范围波长(颜色)的其自身发出另一范围波长(颜色)的光。
光。
需要荧光显微镜观察结果;
标本不能长期保存;
敏感性高,背景低;
标本可以用多种荧光素标记。
中心实验室李三华常用荧光素常用荧光素异硫氰酸荧光素异硫氰酸荧光素(fluoresceinisothiocyanatefluoresceinisothiocyanatefluoresceinisothiocyanatefluoresceinisothiocyanate,FITC)FITC)FITC)FITC),最大吸收光波长为,最大吸收光波长为,最大吸收光波长为,最大吸收光波长为490490490490495nm495nm495nm495nm,最大发射,最大发射,最大发射,最大发射光波长为光波长为光波长为光波长为520520520520530nm530nm530nm530nm,呈明亮的,呈明亮的,呈明亮的,呈明亮的黄绿色黄绿色黄绿色黄绿色。
四乙基罗丹明四乙基罗丹明四乙基罗丹明四乙基罗丹明(rhodaminerhodaminerhodaminerhodamine,RB200,RB200,RB200,RB200),最大吸收光波),最大吸收光波),最大吸收光波),最大吸收光波长为长为长为长为570nm570nm570nm570nm,最大发射光波长为,最大发射光波长为,最大发射光波长为,最大发射光波长为595595595595600nm600nm600nm600nm,呈,呈,呈,呈橘橘橘橘红色红色红色红色。
藻红蛋白(藻红蛋白(P-P-phycoerythrinphycoerythrin,PEPE),),最大吸收最大吸收最大吸收最大吸收波长约波长约波长约波长约490nm490nm490nm490nm,最大发射约为,最大发射约为,最大发射约为,最大发射约为677nm677nm677nm677nm,呈,呈,呈,呈红色红色红色红色。
中心实验室李三华
(2)
(2)按抗体、抗原与标记物的作用方式按抗体、抗原与标记物的作用方式直接法:
直接法:
特异性抗体(一抗)与抗原结合;
标记物直接连接在一抗上。
组织抗原组织抗原第一抗体第一抗体标记物标记物中心实验室李三华特点:
方法简单、省时,专一性强;
非特异染色轻;
敏感性差;
一种标记抗体只能检测一种抗一种标记抗体只能检测一种抗原。
原。
中心实验室李三华间接法间接法一抗与待检测的抗原结合;
一抗与待检测的抗原结合;
二抗与一抗结合(一抗作为二抗的抗原)二抗与一抗结合(一抗作为二抗的抗原);
标记物连接在二抗上。
组织抗原组织抗原第一抗体第一抗体第二抗体第二抗体标记物标记物中心实验室李三华特点:
敏感性高;
一种标记抗体(二抗)能用于同一一种标记抗体(二抗)能用于同一中物种中多种抗原的检测;
中物种中多种抗原的检测;
样本样本样本样本1111:
兔(:
兔(VEGFVEGFVEGFVEGF)样本样本样本样本2222:
人(:
人(P53P53P53P53)一抗:
小鼠抗兔(一抗:
小鼠抗兔(IgGIgGIgGIgG)一抗:
小鼠抗人(一抗:
小鼠抗人(IgGIgGIgGIgG)二抗:
二抗:
HRPHRPHRPHRP标记标记标记标记山羊山羊山羊山羊*抗抗抗抗*小鼠小鼠小鼠小鼠IgGIgGIgGIgG费时,非特异染色稍重。
费时,非特异染色稍重。
中心实验室李三华四四抗体的选择及保存和反应条件抗体的选择及保存和反应条件(11)抗体的种属来源(宿主)抗体的种属来源(宿主)样本,一抗,二抗来自于不同种属样本,一抗,二抗来自于不同种属样本:
大鼠样本:
大鼠样本:
人样本:
人一抗:
兔一抗:
兔一抗:
小鼠一抗:
小鼠二抗:
山羊二抗:
山羊二抗:
兔二抗:
兔(22)反应特异性)反应特异性该抗体适合检测哪些种属动物体内的抗该抗体适合检测哪些种属动物体内的抗原,不同种属间可能存在反应差异。
原,不同种属间可能存在反应差异。
中心实验室李三华(33)类型)类型单克隆抗体单克隆抗体(小鼠来源小鼠来源),),多克隆抗体。
多克隆抗体。
(44)应用范围)应用范围IHC,WB,FC,ELISA,IPIHC,WB,FC,ELISA,IP;
石蜡切片石蜡切片(IHCIHCIHCIHCP),P),P),P),冰冻切片冰冻切片冰冻切片冰冻切片(IHC(IHC(IHC(IHCFr),Fr),Fr),Fr),甲醛固定冰冻切片(甲醛固定冰冻切片(IHC-IHC-IHC-IHC-FoFrFoFrFoFrFoFr)。
)。
(5)(5)与抗原结合的部位与抗原结合的部位亚型,亚型,C-C-或或N-N-,胞外区域或胞内区域。
,胞外区域或胞内区域。
(66)公司,价格。
)公司,价格。
中心实验室李三华用途用途用途用途公司公司公司公司用途用途用途用途公司公司公司公司最全最全最全最全SantaSantaSantaSantacruzcruzcruzcruz,abcamabcamabcamabcam细胞分选细胞分选细胞分选细胞分选美天旎美天旎美天旎美天旎离子通道离子通道离子通道离子通道alomonealomonealomonealomone激素激素激素激素DAKODAKODAKODAKO信号转导信号转导信号转导信号转导CSTCSTCSTCST,SwantSwantSwantSwant新功能蛋白新功能蛋白新功能蛋白新功能蛋白AbnovaAbnovaAbnovaAbnova细胞因子细胞因子细胞因子细胞因子R&
DR&
D,RayBiotechRayBiotechRayBiotechRayBiotech神经科学神经科学神经科学神经科学ImmunostarImmunostarImmunostarImmunostar,millporemillporemillporemillpore激酶激酶激酶激酶AnaSpecAnaSpecAnaSpecAnaSpecELISAELISAELISAELISA试剂盒试剂盒试剂盒试剂盒R&
D,RayBiotechRayBiotechRayBiotechRayBiotech信号通路激动信号通路激动信号通路激动信号通路激动剂、抑制剂、剂、抑制剂、剂、抑制剂、剂、抑制剂、化合
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