动物生物化学实验教程正式.docx
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动物生物化学实验教程正式
实验一血清蛋白质含量测定
牛血清蛋白:
BSA。
血浆:
指血液的液体成分,淡黄色(因含胆红素)。
含白蛋白、球蛋白、纤维蛋白原。
血液经抗凝处理、离心沉淀后,获得的液体部分。
血清:
血液凝固后,释出的液体。
不含纤维蛋白原及游离钙离子。
蛋白质定量分析是动物生物化学和其他生命科学研究中经常用到的实验项目。
蛋白质是生物体内最为重要的生物大分子之一,其种类繁多、结构多样、功能各异,而且分子量相差很大,所以很难建立一个理想而通用的蛋白质定量分析方法。
目前测定蛋白质含量的方法很多,常用的测定方法有Folin—酚法(Lowry法)、紫外吸收法、凯氏定氮法、考马斯亮蓝染料结合法等,每种方法在实践中都有其优点和局限性。
本实验采用考马斯亮蓝染料结合法(Bradford法)。
(灵敏度最高)
一、实验目的
1.掌握分光光度法测定的原理,分光光度计的结构和基本操作要点
(光源-单色器-样品室-检测器-显示器)
2.掌握考马斯亮蓝染料结合法测定蛋白质含量的原理和操作方法
3.掌握微量移液器的使用方法
4.了解蛋白质含量测定中标准曲线的制作方法
二、实验原理
染料考马斯亮蓝G-250(R250,结合后可以解离)在游离状态下呈红色,最大吸收峰为465nm。
它能与蛋白质的疏水微区结合,形成蓝色复合物,该复合物的最大吸收峰为595nm,在一定浓度范围内(为什么在一定范围内),其吸光度值与蛋白质含量成正比,故可用于蛋白质含量的测定。
三、实验操作步骤
取两只干净的试管,按表1-1编号,并加入试剂,混匀。
为什么空白管为0.9%NaCl?
表1-1考马斯亮蓝染料结合法测定蛋白质含量
试管号
空白管
样品管
稀释的血清样品(mL)
-
0.1
0.9%NaCl溶液(mL)
0.1
-
考马斯亮蓝G-250溶液(mL)
5
5
室温静置5min,于波长595nm处,以空白管调“0”,测定样品管的吸光度值,查标准曲线,吸光度测定值所对应的蛋白质浓度就是稀释样品的蛋白质含量,然后乘以血清的稀释倍数(10倍),可得血清中蛋白质的含量。
四、实验试剂
1.考马斯亮蓝G-250溶液(0.01%):
称取考马斯亮蓝G-250100mg,溶于50mL95%乙醇中,再加入100mL85%(W/V)浓磷酸,然后用蒸馏水定容至1000mL,置棕色瓶过夜(如有不容物,可用二层滤纸过滤)。
2.0.9%NaCl溶液:
称取NaCl9g,加水溶解,定容至1000mL。
3.稀释血清:
用0.9%NaCl溶液,将新鲜血清稀释10倍。
4.考马斯亮蓝结合法测定蛋白质含量的标准曲线绘制
蛋白质标准液(1mg/mL):
小牛血清白蛋白100mg加生理盐水至100mL。
取11支干净试管编号,按表1-2加入试剂,混匀,室温静置3min,于波长595nm处,以0号管调“0”,测定样品管的吸光度值。
表1-2考马斯亮蓝染料结合法测定蛋白质含量的标准曲线绘制
编号
0
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
标准蛋白质溶液(μL)
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100
0.9%NaCl溶液(μL)
100
90
80
70
60
50
40
30
20
10
0
考马斯亮蓝G-250溶液(mL)
5
5
5
5
5
5
5
5
5
5
5
以各管的蛋白质浓度为横坐标,以光密度值为纵坐标,绘制标准曲线。
(表1-3)
表1-3不同浓度标准蛋白质溶液对应的光密度值
管号
0
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
标准蛋白质溶液浓度(μg/mL)
0
100
200
300
400
500
600
700
800
900
1000
光密度值
五、实验器材
分光光度计、试管、吸管、20-200μL量程微量移液器。
六、实验过程中应注意的问题
本法待测液0.1mL中含蛋白质10~80μg为宜,如果样品蛋白质浓度过高,可用生理盐水适当稀释后再测。
七、实验的考察点
分光光度法的原理,分光光度计的构造、工作原理、一般操作方法及注意事项,考马斯亮蓝染料结合法测定蛋白质含量的原理,实验测定数据的读数、纪录和处理,蛋白质含量测定标准曲线的制作,利用标准曲线测定蛋白质含量,移液管的正确使用,微量移液器的正确使用。
观察和分析实验结果,通过推理得出合理的实验结论,实验报告撰写的格式。
实验二唾液淀粉酶活性影响因素的观察
酶具有催化效率高、专一性强、反应条件温和等优点,目前在科学研究、食品加工、饲料生产、医疗卫生等领域具有广泛的应用。
但是酶的活性很容易受到环境条件的影响,例如温度、pH值、激活剂、抑制剂等,因此在实际应用之前,必须首先考虑酶的动力学性质,以及影响酶活性的各种因素。
本实验以唾液淀粉酶为对象观察影响酶酶活性的各种因素,是酶学研究和应用的基本实验。
一、实验目的
1.通过实验了解酶的基本性质及影响酶活性的各种因素
2.学习测定酶的最适温度、最适pH值的方法
二、实验原理
唾液淀粉酶能将淀粉水解为糊精、极限糊精、麦芽糖等,这些产物与碘反应产生不同的颜色,因此可以根据显色的差异,判断化学反应速度的大小,从而确定酶活性的高低。
本实验通过改变影响唾液淀粉酶活性的一种因素,控制酶促反应体系中的其他因素,使其保持一致,观测酶促反应速度,以分析单个因素对唾液淀粉酶活性的影响。
三、实验操作步骤
(一)唾液淀粉酶的制备:
每人用自来水漱口3次,然后取20mL蒸馏水含于口中,做咀嚼动作,3min分钟后,吐入烧杯中,纱布过滤,取滤液10mL,稀释至20mL,获得稀释唾液。
(二)酶活性影响因素的观察
1.温度对酶活性的影响
(1)取3支试管,编号后按表2-1加入试剂,混匀,置于相应温度下反应。
表2-1温度对酶活性的影响
试管号
0.5%的淀粉溶液(mL)
pH6.8的缓冲液(mL)
稀释唾液(mL)
温度
℃
1
3
0.5
1
0
2
3
0.5
1
37
3
3
0.5
1
100
(2)取碘液2滴于白色比色板的各反应孔中,自试管放入水浴箱后,每隔1min从2号管中取反应液1滴,与其中一个反应孔内的碘液混合,观察颜色变化。
(3)待2号管中的反应液遇碘液不发生颜色变化(即呈碘色)时,向各管中加入碘液2滴,摇匀,观察并记录各管颜色(注意:
第三管需自来水冷却,否则不显蓝色),根据观察结果分析温度对酶活性的影响,并确定唾液淀粉酶的最适温度。
2.pH对酶活性的影响
(1)取3支试管,编号后按表2-2加入试剂:
表2-2pH对酶活性的影响
试管号
0.5%的淀粉溶液(mL)
pH5.0缓冲液(mL)
pH6.8缓冲液(mL)
pH8.0缓冲液(mL)
稀释唾液(mL)
1
2
2
0
0
1
2
2
0
2
0
1
3
2
0
0
2
1
(2)摇匀,置于37℃水浴箱保温。
取碘液2滴于白色比色板的各反应孔中,自试管放入水浴后,每隔1min,从2号管中取反应液1滴,与其中一个反应孔内的碘液混合,观察颜色变化,直至呈碘色。
(3)取出3个试管,立即各自加入碘液2滴,充分摇匀,观察各管呈现的颜色,判断不同pH值中淀粉水解的程度,并确定最适pH。
3.酶的激活剂及抑制剂对酶活性的影响
(1)取3支试管,编号后按表2-3加入试剂:
表2-3激活剂及抑制剂对酶活性的影响
试管号
0.5%的淀粉溶液(mL)
0.5%NaCl(mL)
蒸馏水(mL)
1%CuSO4(mL)
稀释唾液(mL)
1
2
0
0
1
1
2
2
1
0
0
1
3
2
0
1
0
1
(2)将3支试管混匀,放入37℃水浴中,并在白色比色盘上用碘液检查2号管,待碘液不变色时,向各管加碘液1滴,观察水解情况,记录并解释结果。
4.酶专一性观察
(1)取2支试管,编号后按表2-4加入试剂:
表2-4酶作用专一性观察
试管号
0.5%淀粉溶液(mL)
0.5%蔗糖液(mL)
pH6.8缓冲液(mL)
稀释唾液(mL)
1
2
-
0.5
1
2
-
2
0.5
1
(2)将2支试管混匀,37℃保温,10min。
(3)取出试管,分别加入斑氏试剂2mL,混匀,于沸水中加热3min,观察各管颜色,记录实验结果,确定酶的底物,分析酶作用的专一性。
四、实验试剂
1.0.5g/L淀粉液:
称取0.5g可溶性淀粉,加少量的蒸馏水,在研钵中调成糊状,再徐徐倒入90mL沸水,同时不断搅拌,冷却后用蒸馏水定容至100mL。
2.1%NaCl:
称取氯化钠1g,加少量蒸馏水将之溶解后,定容至100mL。
3.1%CuSO4:
称取氯化钠1g,加少量蒸馏水将之溶解后,定容至100mL。
4.0.2mol/LpH5-8缓冲液:
分别配制下列二液,再按下表混合。
(1)A液—0.2mol/LNa2HPO4溶液:
称取Na2HPO4·12H2O35.62g,加少量蒸馏水将之溶解后,定容至1000mL。
(2)B液—0.1mol/L柠檬酸溶液:
称取无水柠檬酸19.212g,加少量蒸馏水将之溶解后,定容至1000mL。
不同pH缓冲液配置按表2-5加入试剂
表2-5不同pH缓冲液配置
pH
0.2mol/LNa2HPO4溶液(mL)
0.1mol/L柠檬酸溶液(mL)
5
10.30
9.70
6.8
14.55
5.45
8
19.45
0.55
5.稀碘液:
碘化钾1g加少许水溶解后,再加碘0.5g,溶解后加水至100mL,混匀。
用时加水稀释10倍。
6.0.5%蔗糖液:
称取蔗糖0.5g,加少量蒸馏水将之溶解后,定容至100mL。
7.斑氏试剂:
柠檬酸钠173g和碳酸钠100g溶于约700mL水中,另将硫酸铜17.3g溶于100mL水中,分别加热助溶,冷却后将两液混合,再加水至1000mL混匀。
8.冰块1kg
五、实验器材
按每组计:
试管6支,10mL量筒个,小漏斗1个,脱脂纱布1块,1mL、2mL、5mL吸管各2支,37℃恒温水浴箱、100℃恒温水浴箱各1个,盆1个,白瓷板2个,40mL试剂瓶8个,100mL烧杯2个,试管架1个,吸耳球2个,滴管2个,吸管架1个。
六、实验过程中应注意的问题
该实验最关键的环节是酶促反应终点的判断,既不能过早又不能过晚;温度对酶活性影响实验中,试管从沸水中取出后,先用流动水冷却,再滴加碘液;加碘液时,应逐滴加,直到三管颜色不同为止。
七、本实验的考察点
实验原理;影响酶活性的因素及其作用规律,唾液淀粉酶稀释液的制备,最适温度、最适pH的测定方法,移液管的使用,酶动力学实验设计的方法(包括温度梯度、pH梯度的制作),连续取样法观测酶促反应进程,确定反应终点,观察和分析实验结果,通过推理得出合理的实验结论,实验报告撰写的格式。
实验三血液葡萄糖测定——福林—吴宪法
血液中所含的葡萄糖,称为血糖。
它是糖在体内的运输形式。
目前国内临床上多采用葡萄糖氧化酶法和邻甲苯胺法测定血糖。
前者特异性强、价廉、方法简单;后者具有操作简单,特异性较高的优点,试剂成本也较低,但该方法一般需要在浓酸高温条件下发生反应,因此在做血糖测定时必需多加注意。
本实验采用福林—吴宪法测定血液中的葡萄糖。
一、实验目的
1.掌握福林-吴宪法测定血液葡萄糖含量的原理
2.掌握无蛋白滤液的制备方法
二、实验原理
血清中的葡萄糖和碱性铜在加热条件下反应,生成氧化亚铜,氧化亚铜与磷钼酸试剂反应生成蓝色物质,其溶液在420nm波长处的光密度值与血糖浓度成正比,据此可以测定血液中葡萄糖的含量。
三、实验操作步骤
1.制备1∶10全血无蛋白滤液:
取1份抗凝血,加入8份1/24mol/L硫酸溶液,此时血细胞迅速破裂,颜色变黑,再加入10%钨酸钠1份,摇匀,3000转/min离心10min,取上清液,过滤,得到无色澄清无蛋白滤液。
2.取3支血糖管按表3-1加入试剂:
表3-1福林-吴宪法测定血糖
试管号
空白管
标准管
测定管
蒸馏水(mL)
1.0
—
—
标准葡萄糖应用液(mL)
—
1.0
—
无蛋白滤液(mL)
—
—
1.0
碱性同试剂(mL)
2.0
2.0
2.0
混匀,置沸水浴中煮8分钟,取出,用流动自来水冷却三分钟(且勿摇动血糖管)
磷钼酸试剂(mL)
2.0
2.0
2.0
混匀后放置2分钟(使CO2气体逸出)
1∶4磷钼酸加至(mL)
12.5
12.5
12.5
1∶4磷钼酸溶液加至12.5mL后,用橡皮赛塞紧管口,颠倒混匀,用空白管调0点在420nm波长处比色,读取各管光密度值,按下列公式计算100mL血液中血糖的浓度:
四、实验试剂
1.1/24mol/L硫酸溶液:
取浓硫酸(密度1.84)4.62mL,加入到约500mL蒸馏水中,再定容至1000mL。
用0.lmol/LNaOH标定,调整至1/12mol/L。
2.10%(W/V)钨酸钠溶液:
将钨酸钠(Na2WO4·2H2O)l0g溶于蒸馏水,使全量至100mL(此液呈弱碱性,取l0mL用0.lmol/LHCl溶液滴定,达中和时需0.lmol/LHCl0.4mL)。
3.碱性硫酸铜试剂:
取无水碳酸钠40g溶于约400mL蒸馏水中;酒石酸7.5g溶于约300mL蒸馏水中,结晶硫酸铜4.5g溶于200mL水中,均加热助溶。
冷却后,将酒石酸溶液倾入碳酸钠溶液中,混匀,移入1000mL容量瓶中,再将硫酸铜溶液倾入并加入蒸馏水至刻度。
混匀,贮存于棕色瓶中。
4.磷钼酸试剂:
取钼酸(HMoO4)70g和钨酸钠10g,加入10%NaOH溶液400mL及蒸馏水400mL,混合后煮沸20~40min,以除去钼酸中存在的氨(直至无氨味为止),冷却后加入浓磷酸(80%)250mL,混匀,最后以蒸馏水稀释至1000mL。
5.0.25%苯甲酸溶液:
称取苯甲酸2.5g,加入1000mL蒸馏水中,煮沸使溶解,冷却后补加蒸馏水至1000mL,贮于瓶中,可长期保存。
6.葡萄糖贮存标准液(l0mg/mL):
将少量无水葡萄糖(A.R或C.P)置于硫酸干燥器内过夜。
精确称取此葡萄糖1.000g,以0.25%苯甲酸溶液溶解并转入100mL容量瓶内,再以0.25%苯甲酸溶液稀释至100mL刻度,置冰箱中可长期保存。
7.葡萄糖应用标准液(0.lmg/mL):
准确吸取葡萄糖贮存标准液1.0mL,置100mL容量瓶内,以0.25%苯甲酸溶液稀释至100mL刻度。
8.1:
4磷钼酸稀释液:
取磷钼酸试剂1份,加蒸馏水4份,混匀即可。
9.抗凝血:
称取EDTANa216mg于干净烧杯中,采集20mL新鲜血液,摇匀,置于4℃冰箱备用。
五、实验器材
分光光度计,恒温水浴箱,刻度吸管,玻璃漏斗,血糖管,试管
六、实验过程中应注意的问题:
一定要等水沸后再放入血糖管进行水浴加热;水浴箱中水面应高于血糖管中溶液的液面;加热时间必须准确;流动水冷却时切勿摇动试管;加入钼酸试剂后应及时放气。
七、本实验的考察点
福林——吴宪法进行血糖测定的原理,抗凝血制备,无蛋白滤液的制备,离心机的使用,血糖管的使用,实验测定数据的读数、纪录、处理,公式法计算血糖含量。
实验四血清总脂测定——香草醛法
血清总脂指血清中各种脂类的总和。
测定血清总脂的方法有称量法、比色法、染色法等。
其中称量法比较准确,可作为参考标准。
比色法简单易行,为常用的测定方法,本实验采用香草醛法。
一、实验目的
1.学习总脂测定的原理和方法。
2.掌握微量吸管的正确使用方法。
二、实验原理
不饱和脂类物质在加热条件下,与浓硫酸发生反应,产生正碳粒子,正碳粒子与磷酸香草醛反应生成紫色物质,其溶液在525nm处的吸光值,与脂的浓度成正比。
三、实验操作步骤
取3支洁净试管,按下表4-1操作。
表4-1香草醛法测定血清总脂
试管号
空白管
标准管
测定管
血清(mL)
—
—
0.02
标准液(mL)
—
0.02
—
浓硫酸(mL)
1.0
1.0
1.0
充分混匀。
放置沸水浴中加热10min,使脂类水解,冷水冷却。
显色剂(mL)
4.0
4.0
4.0
用玻璃棒充分混匀,静置20min(或37℃保温15min)后,以空白管调“0点”,在525nm波长处,分别读取各管光密度。
实验结果计算:
四、实验试剂
1.胆固醇标准液(6mg/mL):
精确称取胆固醇600mg,溶解于无水乙醇并定容至100mL。
2.显色剂:
先配置0.6%的香草醛水溶液200mL,再加入浓磷酸800mL。
贮存于棕色瓶中可保存6个月。
3.浓硫酸(分析纯,含量95%以上)。
4.浓磷酸(分析纯,含量85%以上)。
五、实验器材
分光光度计,恒温水浴箱,刻度吸管,微量移液器,试管
六、实验过程中应注意的问题:
实验过程中切勿将试剂洒落实验台、粘附于器皿外或衣物上;试管应干燥;尽量将试剂加入到试管底部。
七、实验考察点
混合成分含量测定的原理和方法,香草醛法测定血脂的操作流程,胆固醇作为标准的理由及其对实验结果的解释,胆固醇标准液的配制、用移液管移取黏度较大的液体,微量液体的使用,水浴锅的使用。
实验五血清蛋白质醋酸纤维薄膜电泳
电泳技术是蛋白质和核酸研究中最常用的生物化学技术。
电泳是指带电粒子在电场中的定向移动,不同的带电粒子由于电荷的差异,在电场中的迁移率不同,所以在相同时间内,它们迁移的距离不同,据此可以将其分开。
蛋白质是两性电解质,在不同的缓冲液中所带电荷的极性与数量会有所不同,因而在电场中的行为也相应地会有所不同,因此可以采用电泳的方法将其分离。
一、目的
1.学习电泳的一般原理和方法。
2.掌握醋酸纤维薄膜电泳分离蛋白质的技术。
二、实验原理
带电粒子在电场中的定向移动称为电泳。
醋酸纤维薄膜电泳是用用醋酸纤维薄膜作为支持物的电泳方法。
醋酸纤维薄膜由二乙酸纤维素制成,它具有均一的泡沫样的结构,有强渗透性,对分子移动无阻力。
蛋白质是两性电解质,在pH 血清中主要含有白蛋白、α1-球蛋白、α2-球蛋白、β-球蛋白、γ-球蛋白,在pH8.6的缓冲溶液中,此5种蛋白质都带负电,在电场中都向正极移动,但由于这5种蛋白质的相对分子量、等电点及形状等不同,它们在电场中的移动速度不同,故采用电泳的方法可以将其分离。 三、实验操作步骤 (一)仪器和薄膜的准备 1.醋酸纤维薄膜的润湿和选择 将薄膜裁成(2×8cm)条状,使其漂在缓冲液液面上,如果迅速湿润,而且整条薄膜颜色一致而无白色斑点,则表明薄膜质地均匀(实验中应选择质地均匀的薄膜)。 然后再用竹夹轻轻将薄膜完全浸入缓冲液中,待薄膜完全浸透后使用。 2.制作电桥 将电泳电极缓冲液倒入电泳槽两边的缓冲液池中,并用虹吸管平衡两侧的液面。 根据电泳槽的纵向尺寸,于两电极槽各放入四层纱布,一端浸入缓冲液中,另一端贴附在电泳槽支架上。 它们的作用是联系薄膜与两端电极缓冲液之间的中间“桥梁”。 (二)点样 取出浸透的薄膜,平放在滤纸上(无光泽面朝上),轻轻吸去多余的缓冲液。 取血清0.1mL放于洁净载玻片上,再加上0.5mL0.03%溴酚蓝,混匀。 用点样器蘸一下(约2-3mL),再“印”在薄膜的点样区。 注意,应使血清均匀的分布在点样区内,这是获得清晰区带的电泳图谱的重要环节之一。 点样区 (三)电泳 将点好样的薄膜(无光泽面朝下)两端紧贴在支架的纱布上。 平衡十分钟,接通电源(负极靠点样端),调节电流为0.4-0.6mA(薄膜每厘米宽),电压为每厘米长10-12V(总电压60~70V),电泳45-60min。 (四)染色 电泳完毕,关闭电源,立即取出薄膜,直接浸入染色液中5min。 然后用漂洗液漂洗,每隔10min左右换一次漂洗液,连续两次,使背景颜色脱去,夹在滤纸中吸干。 (五)结果判断 一般经漂洗后,薄膜上可呈现清晰的5条区带,由正极端起,依次为清蛋白、α1球蛋白、α2球蛋白、β球蛋白、和г球蛋白。 清蛋白α1α2βг原点 正极 负极 (六)透明 将用滤纸吸干的薄膜,浸入透明液甲液中,2min后立即取出,并进入透明液的乙液中,1min(要准确)后迅速取出,紧贴在载物片上,赶走气泡。 约2-3min内薄膜完全透明,待干后置于切片盒中,可长期保存。 四、实验试剂 1.新鲜血清 2.巴比妥缓冲液(pH8.6,离子强度0.06): 称取巴比妥钠12.76g,巴比妥1.66g,加蒸馏水加热溶解,稀释至1000mL。 3.氨基黑10B染色液: 称取氨基黑10B0.5g,甲醇50mL,冰醋酸l0mL,加水至100mL。 4.漂洗液: 95%乙醇45mL、冰醋酸5mL和蒸馏水50mL,混匀。 5.透明液: 甲液: 冰醋酸15mL和无水乙醇85mL混匀。 乙液: 冰醋酸25mL和无水乙醇75mL混匀。 五、实验器材 醋酸纤维薄膜(2×8cm)、电泳仪、薄膜电泳槽、点样器(盖玻片)、培养皿、粗滤纸、玻璃板(载玻片)、镊子 六、实验过程中应注意的问题: 点样式关键,要少、轻、直、匀;不要将薄膜吸得过干;漂洗时不要用镊子来回拉动;节约漂洗液,要注意电流强度。 七、实验的考察点 电泳的一般原理和操作步骤,SDS-PAGE电泳法测定蛋白质分子量的原理,醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白质的原理和操作步骤。 实验六碱性磷酸酯酶的分离与制备 酶是一种蛋白质,具有催化效率高、专一性强、作用条件温和等优点,目前在科学研究、食品加工、饲料生产、医疗卫生等方面具有广泛的应用。 无论是在基础研究中,还是在实际生产中,必须对酶进行分离和纯化,因此,酶的分离纯化是酶学研究和应用,乃至蛋白质科学研究和生命科学研究的基础。 碱性磷酸酯酶(ALP或AKP)是广泛分布于人体肝脏、骨骼、肠、肾和胎盘等组织经肝脏向外排出的一种酶。 碱性磷酸酯酶主要功能是催化核酸分子脱掉5’磷酸基团,从而使DNA或RNA片段的5’-P末端转换成5’-OH末端。 碱性磷酸酯酶是分子生物技术常用的工具酶之一,也是免疫诊断试剂产品最常用的标记酶,临床上,碱性磷酸酶主要用于阻塞性黄疸、原发性肝癌、继发性肝癌、胆汁淤积性肝炎等的检查。 有机溶剂分级沉淀法是分离蛋白质的常用方法之一,有机溶剂能使很多溶于水的生物大分子发生时沉淀,不同的蛋白质在不同浓度的不同有机溶中的溶解度不同。 。 本实验依据碱性磷酸酯酶的性质,采用有机溶剂分级沉淀法提取分离碱性磷酸酯酶。 一、实验目的: 1
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