检验师考试临检1.docx
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检验师考试临检1
1.血液由血细胞(红细胞、白细胞、血小板)和血浆组成。
离体自然凝固,分离的淡黄色透明液体称为血清。
血液加抗凝剂后分离出来的淡黄色液体称为血浆。
血清与血浆相比,血清缺少某些凝血因子,如凝血因子Ⅰ(纤维蛋白原)、Ⅱ(凝血酶原)、Ⅴ、Ⅷ等。
2.血量正常成人血量约4~5L,占体重的6%~8%,其中血浆占55%,血细胞占45%。
女性妊娠期间血量可增加23%~25%。
酸碱度pH7.35~7.45。
比密正常男性1.055~1.063,女性1.05l~1.060,相对黏度为4~5;血浆比密1.025~1.030;血细胞比密1.090。
血浆渗透量正常人290~310mOsm/kg?
H2O。
3.血液特性包括红细胞的悬浮稳定性、粘滞性和凝固性。
正常人血液中红细胞呈均匀混悬状态,全血粘度约为生理盐水粘度的4~5倍;血浆粘度为生理盐水的1.6倍。
血液粘度与血细胞比容和血浆粘度有关,血浆中纤维蛋白原、球蛋白等大分子蛋白质的浓度越高,血浆粘度越高。
由于凝血因子的作用,血液离开血管后,数分钟内便自行凝固。
血液的主要生理功能有运输功能、协调功能、维护机体内环境稳定和防御功能。
4.静脉采血法静脉采血以肘部静脉、手背静脉、内踝静脉或股静脉为多。
小儿可从颈外静脉采血。
皮肤采血法通常选择耳垂或手指部位,手指采血比耳垂采血检测结果稳定。
WHO推荐采集左手无名指指端内侧血液,婴幼儿可采集大拇趾或足跟内外侧缘血液,严重烧伤患者,可选择皮肤完整处采血。
真空采血法又称负压采血法。
真空采血装置有套筒式、头皮静脉式两种。
这种封闭式采血方法能减少溶血、保护血液有形成分,提高检测结果的可靠性。
还能有效避免医护人员和患者间交叉感染。
不同检验项目选用不同色码的真空定量采血容器。
方法学评价皮肤采血易于溶血、凝血、混入组织液,影响检查结果。
开放式静脉采血法的操作环节多、难于规范统一,在移液和丢弃注射器时可能造成血液污染。
封闭式静脉采血法操作规范,有利于样本收集运送和保存,防止院内血源性传染病。
5.抗凝是用物理或化学方法除去或抑制血液中某些凝血因子的活性,阻止血液凝固。
常用的抗凝剂:
①乙二胺四乙酸(EDTA)盐:
与血液中Ca2+形成螯合物,使Ca2+失去凝血作用。
不适于凝血检查和血小板功能试验。
②草酸盐:
草酸根离子与样本中Ca2+形成草酸钙沉淀,使Ca2+失去凝血作用。
草酸盐与血液比例为1:
9。
不适于凝血检查。
③双草酸盐抗凝剂:
适用于血细胞比容、全血细胞计数(CBC)、网织红细胞计数等检查,不适于血小板计数和白细胞分类计数。
④肝素:
阻止凝血酶的形成和血小板聚集,是红细胞透渗脆性试验的理想抗凝剂,不适于CBC和细胞形态学检查。
⑤枸橼酸盐:
与血中Ca2+结合形成螯合物,阻止血液凝固。
适用于红细胞沉降率、凝血检查,是输血保养液的成分。
6.新载玻片常带有游离碱质,须用1mol/LHCl清洗。
血涂片的制备:
好的血片应厚薄适宜、头体尾明显、细胞分布均匀、血膜边缘整齐、留有空隙。
①手工推片法:
血滴大小、推片与载玻片间夹角、推片速度、血细胞比容与涂片厚薄有关。
②载玻片压拉法:
适用于血细胞活体染色。
③棕黄层涂片法:
用于白细胞减低者的白细胞分类计数、红斑狼疮细胞检查等。
7.瑞氏染色法染色原理包括物理吸附和化学亲和作用。
瑞氏染料由酸性染料伊红和碱性染料亚甲蓝(又名美蓝)组成。
血红蛋白、嗜酸性颗粒与伊红结合,呈粉红色;细胞核蛋白、淋巴细胞、嗜碱性粒细胞胞质与美蓝或天青(美蓝的氧化形式)结合,呈紫蓝色或蓝色;中性颗粒与伊红和美蓝结合,呈淡紫红色。
染色深浅与染液pH值(最适pH为6.4~6.8)、细胞数量、血膜厚度、染色时间、染液浓度有关。
吉姆萨染色 染色原理和结果与瑞氏染色基本相同。
瑞氏染液由天青、伊红组成。
吉姆萨染液由吉姆萨染料、甘油和甲醇组成
8.手工推片法应用最广泛,棕黄层涂片法可提高异常情况的阳性检出率。
疟原虫、微丝蚴等检查可采用厚血涂片法。
瑞氏染色法最常用,对细胞质成分、中性颗粒染色效果好。
吉姆萨染液对细胞核和寄生虫的着色好,是观察细胞核和寄生虫的首选染色方法。
瑞氏-吉姆萨复合染液可获得满意的细胞胞质、颗粒、胞核等的染色效果。
制备涂片时,血细胞比容增高、血液粘度较高时,应采用小血滴、小角度、慢推;而血细胞比容减低、血液较稀时,应采用大血滴、大角度、快推
9..红细胞的生成①红细胞是血液中数量最多的有形成分。
②起源于骨髓造血干细胞。
③从造血干细胞分化发育到网织红细胞在骨髓中进行,约需72h。
④在骨髓或血液中,网织红细胞到成熟红细胞约需48h。
⑤红细胞平均寿命约120d。
⑥衰老红细胞主要在脾破坏,分解为铁、珠蛋白和胆红素。
红细胞生理功能通过血红蛋白实现交换和携带气体功能。
10.结构血红蛋白(Hb)由两对珠蛋白肽链和4个亚铁血红素构成。
①珠蛋白:
4条肽链(每分子Hb由2条α类肽链和2条β类肽链组成)。
②亚铁血红素:
原卟啉、铁。
特点①正常情况下,99%Hb为还原Hb(HbA),1%为高铁Hb(HbF)。
②只有Fe2+状态的Hb才能与氧结合,称为氧合血红蛋白。
③人体生长各期,Hb的种类与比例不同。
④血红蛋白合成受红细胞生成素、雄激素调节。
⑤血红蛋白相对分子质量为64458。
⑥血红蛋白降解产物为珠蛋白、血红素。
11.手工显微镜法在显微镜下计数一定体积内的红细胞数,经换算求出每升血液中红细胞数量。
不需要特殊设备,但操作复杂、费时。
误差可源自样本、操作、器材和固有误差。
血液分析仪法用电阻抗和(或)光散射原理。
比手工法精确(如电阻抗计数法的变异系数为2%,手工法则>11%)。
当白细胞数量明显增高会干扰红细胞计数结果。
应严格按规程操作,并定期进行室内和室间质控。
12.参考值成年男性(4~5.5)×1012/L;成年女性(3.5~5.0)×1012/L;新生儿(6.0~7.0)×1012/L。
医学决定水平>6.8×1012/L需治疗;<3.5×1012/L诊断为贫血;<1.5×1012/L考虑输血。
临床意义
(1)生理性变化①年龄、性别;②精神因素;③剧烈体力运动和劳动;④气压减低;⑤妊娠。
(2)各种原因的贫血①急性、慢性红细胞丢失过多;②红细胞寿命缩短;③造血原料不足;④骨髓造血功能减退。
(3)红细胞增多。
13.高倍镜下,计数5个中方格内的红细胞数。
RBC=N*25/5*10*10.6*200=N*10.12=N/100*10.12
14.氰化高铁血红蛋白(HiCN)法HiCN法是目前国际推荐测定血红蛋白的方法。
血液中除硫化血红蛋白(SHb)外的各种Hb均可被高铁氰化钾氧化为高铁血红蛋白,再和CN-结合生成稳定的棕红色复合物-氰化高铁血红蛋白,其在540nm处有一吸收峰,用分光光度计测定该处的吸光度,可计算出每升血液中的血红蛋白浓度。
十二烷基硫酸钠血红蛋白(SDS-Hb)法血液中的Hb均可与低浓度SDS作用,生成SDS-Hb棕红色化合物,用分光光度计测定波峰538nm处吸光度,可得到每升血液中的血红蛋白浓度。
15.HiCN法操作简单、显色快、结果稳定可靠、读取吸光度后可直接定值。
缺点是氰化钾(KCN)试剂有剧毒。
SDS-Hb法操作简单、呈色稳定、准确性和精确性符合要求、无公害。
但不能直接用吸光度计算Hb浓度。
叠氮高铁血红蛋白(HiN3)法优点与HiCN测定法相似。
最大吸收峰在542nm,试剂毒性小于氰化钾。
碱羟血红蛋白(AHD575)法试剂简单、呈色稳定、无公害、吸收峰在575nm、可用氯化血红素作为标准品溴代十六烷基三甲胺(CTAB)血红蛋白法试剂溶血性强又不破坏白细胞,适用于仪器上自动检测Hb和白细胞。
缺点是测定结果的准确度和精密度不佳。
沙利(Sahli)酸化血红蛋白法简单易行,但重复性差、误差较大,基本淘汰。
血细胞分析仪操作简单、快速、同时可获得多项红细胞参数。
仪器须经HiCN标准液校正后才能使用。
仪器法测定精度(CV)约为1%
16.异常血浆蛋白质、高脂血症、白细胞数>30×109/L、脂滴等可产生浊度,干扰Hb测定。
静脉血的Hb比毛细血管血低10%~15%。
稀释倍数不准、红细胞溶解不当、血浆中脂质或蛋白质量增加会导致测定值假性增高。
17.参考值成年:
男性(120~160)g/L;女性:
(110~150)g/L。
新生儿:
(170~200)g/L。
老年人(70岁以上):
男性(94.2~122.2)g/L;女性(86.5~111.8)g/L。
临床意义
(1)生理性变化:
随年龄而变化;红细胞和血红蛋白量有天内波动,上午7时达高峰。
(2)病理性变化:
血红蛋白在判断贫血程度方面优于红细胞计数。
18.在5mlHiCN转化液中,加血20ml,充分混合,静置5min后,倒入光径1cm比色皿,在其最大吸收峰波长540nm处,HiCN转化液或蒸馏水调零,测定吸光度(A)。
根据公式直接计算:
。
采用HiCN参考液(50g/L、100g/L、150g/L、200g/L),在分光光度计上,波长540nm处,测定各种参考液的吸光度,以参考液血红蛋白含量为横坐标,吸光度为纵坐标,绘制标准曲线,或求出换算常数(K)。
然后,根据样本吸光度(A)在标准曲线查出血红蛋白浓度,或用K值计算:
Hb(g/L)=K×A。
19.将细胞分布均匀的血涂片进行染色(常用瑞氏染色)后,根据各种细胞的呈色特点,在显微镜下进行观察和识别。
瑞氏染色血涂片可见成熟红细胞呈双凹圆盘形、细胞大小一致、平均直径7.2mm(范围6~9.5mm)、淡粉红色、中央1/3为生理性淡染区、胞质内无异常结构。
20.大小改变①小红细胞:
直径<6mm,见于缺铁性贫血、珠蛋白生成障碍性贫血和遗传性球形细胞增多症。
②大红细胞:
直径>10mm,见于巨幼细胞性贫血、溶血性贫血和恶性贫血等。
③巨红细胞:
直径>15mm,见于巨幼细胞性贫血。
④红细胞大小不均:
见于严重的增生性贫血(如巨幼细胞性贫血)。
血红蛋白含量改变①正常色素性:
正常人、急性失血、再生障碍性贫血和白血病等。
②低色素性:
缺铁性贫血、珠蛋白生成障碍性贫血、铁幼粒细胞性贫血、某些血红蛋白病。
③高色素性:
巨幼细胞性贫血。
④多色性:
正常人(约占1%)、骨髓造红细胞功能活跃(如溶血性或急性失血性贫血)。
⑤细胞着色不一:
同时出现低色素、正常色素性两种细胞,见于铁粒幼红细胞性贫血。
形状改变包括球形红细胞、椭圆形红细胞、靶形红细胞、口形红细胞、镰形红细胞、棘红细胞、裂红细胞、有核红细胞、泪滴形红细胞及红细胞形态不整。
异常结构包括嗜碱性点彩红细胞、豪焦小体(Howell-Jolly’sbody、染色质小体)、卡波环和寄生虫。
21.血细胞比容(Hct或PCV)是指在一定条件下,经离心沉淀压紧的红细胞在全血样本中所占比值。
手工法有折射计法、粘度法、比密测定法、离心法和放射性核素法。
①温氏法(Wintrobe法):
采用中速离心,不能完全排除红细胞间残留血浆,测定结果偏高。
②微量法:
采用高速离心使残留血浆比温氏法少,样本用量小、操作简便、残留血浆1%~3%。
血液分析仪法仪器法CV为1%,手工法CV为2%,仪器法应注意红细胞增多症或血浆渗透压异常时会出现误差。
22.参考值①温氏法:
男性0.40~0.54;女性0.37~0.47。
②微量法:
男性0.47±0.04;女性0.42±0.05。
临床意义①增高:
大量呕吐、大手术后、腹泻、失血、大面积烧伤、真性红细胞增多症、继发性红细胞增多症等。
②减低:
各种贫血。
③输液评估:
是临床输血、输液治疗疗效观察的指标。
④计算平均值:
作为红细胞平均体积、红细胞平均血红蛋白浓度计算的基础数据。
23.红细胞平均指数包括红细胞平均容积(MCV),红细胞平均血红蛋白含量(MCH)和红细胞平均血红蛋白浓度(MCHC)。
手工法通过红细胞计数、血红蛋白量和血细胞比容值计算红细胞平均指数。
(1)红细胞平均容积:
MCV=Hct/RBC(fl)。
(2)红细胞血平均红蛋白含量:
M
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