SARS.ppt
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第一阶段:
第一阶段:
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对已知的重大传染病的排查对已知的重大传染病的排查对已知的重大传染病的排查对已知的重大传染病的排查第二阶段:
第二阶段:
第二阶段:
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衣原体感染的研究衣原体感染的研究衣原体感染的研究衣原体感染的研究第三阶段:
第三阶段:
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SARS-SARS-CoVCoV的的的的研究研究研究研究第一阶段:
第一阶段:
对重大传染病的排查对重大传染病的排查排除:
排除:
炭疽、鼠疫、军团病、禽流感、炭疽、鼠疫、军团病、禽流感、流感、流感、金葡菌感染、厌氧菌感染金葡菌感染、厌氧菌感染腺病毒、汉坦病毒感染腺病毒、汉坦病毒感染衣原体感染衣原体感染肺炎支原体感染肺炎支原体感染立克次体、真菌感染等立克次体、真菌感染等Patient1Patient1Patient1Patient1第二阶段:
第二阶段:
第二阶段:
第二阶段:
衣原体感染的研究衣原体感染的研究在尸检病人肺组织中发现衣原体样颗粒在尸检病人肺组织中发现衣原体样颗粒在尸检病人肺组织中发现衣原体样颗粒在尸检病人肺组织中发现衣原体样颗粒证明证明证明证明SARSSARS病人可以有衣原体感染病人可以有衣原体感染病人可以有衣原体感染病人可以有衣原体感染Patient2Patient2Patient2Patient2第三阶段第三阶段第三阶段第三阶段:
SARS-SARS-CoVCoV的研究的研究的研究的研究1.1.1.1.SARS-SARS-SARS-SARS-CoVCoVCoVCoV的分离培养与鉴定的分离培养与鉴定的分离培养与鉴定的分离培养与鉴定容许性细胞容许性细胞容许性细胞容许性细胞VeroE6VeroE6VeroE6VeroE6、VeroVeroVeroVero、MDCKMDCKMDCKMDCK、人胚肺细胞人胚肺细胞人胚肺细胞人胚肺细胞形态学鉴定形态学鉴定形态学鉴定形态学鉴定鉴定方法鉴定方法鉴定方法鉴定方法免疫学鉴定免疫学鉴定免疫学鉴定免疫学鉴定RT-PCRRT-PCRRT-PCRRT-PCR序列测定序列测定序列测定序列测定毒株编号毒株编号毒株编号毒株编号:
GD322GD322GD322GD322、GDA14GDA14GDA14GDA14免免免免疫疫疫疫荧荧荧荧光光光光试试试试验验验验超薄切片电镜显示超薄切片电镜显示超薄切片电镜显示超薄切片电镜显示VeroE6VeroE6细胞内的细胞内的细胞内的细胞内的SARSSARS冠状病毒冠状病毒冠状病毒冠状病毒1.1.Bar=100nm2.Bar=80nmBar=100nm2.Bar=80nmM:
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外外外外引引引引物物物物位位位位于于于于SARSSARS冠冠冠冠状状状状病病病病毒毒毒毒Tor2Tor2株株株株18138-1832718138-18327位。
内引物位于位。
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内引物位于Tor2Tor2株株株株18186-1829418186-18294位。
位。
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共共共共10101010次次次次循循循循环环环环。
/95/95/95/95,10101010ssss;56565656,10s10s10s10s;72727272,30s30s30s30s。
共共共共40404040次循环。
次循环。
次循环。
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/72/72/72/72,7777minminminmin。
取取取取RT-PCRRT-PCRRT-PCRRT-PCR产产产产物物物物,稀稀稀稀释释释释100100100100倍倍倍倍。
取取取取稀稀稀稀释释释释PCRPCRPCRPCR产产产产物物物物3333llll,10PCR10PCR10PCR10PCR缓缓缓缓冲冲冲冲液液液液3333llll,引引引引物物物物BNIinSBNIinSBNIinSBNIinS和和和和BNIinASBNIinASBNIinASBNIinAS各各各各1111llll,TaKaRaTaKaRaTaKaRaTaKaRaTaqTaqTaqTaqTMTMTMTM聚聚聚聚合合合合酶酶酶酶1111UUUU,10101010MMMMdNTPsdNTPsdNTPsdNTPs1111llll,补补补补水水水水至至至至总总总总体体体体积积积积30303030llll进进进进行行行行PCRPCRPCRPCR扩扩扩扩增增增增。
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共共共共20202020次循环。
次循环。
次循环。
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/72/72/72/72,7777minminminmin。
PCRPCR条件条件条件条件22第第第第一一一一次次次次PCRPCRPCRPCR的的的的退退退退火火火火温温温温度度度度改改改改为为为为45454545度度度度,第第第第2222次次次次PCRPCRPCRPCR的的的的退退退退火火火火温温温温度度度度改改改改为为为为50505050度,均不采用降落度,均不采用降落度,均不采用降落度,均不采用降落PCRPCRPCRPCR的方法,其余同条件的方法,其余同条件的方法,其余同条件的方法,其余同条件1111。
M12345678MDNAMarkerDL2000(TaKaTa)Lane1尸解肺组织外引物扩增产物尸解肺组织外引物扩增产物Lane2尸解肺组织内引物扩增产物尸解肺组织内引物扩增产物Lane3咽拭子标本外引物扩增产物咽拭子标本外引物扩增产物Lane4咽拭子标本内引物扩增产物咽拭子标本内引物扩增产物Lane5嗽口水标本外引物扩增产物嗽口水标本外引物扩增产物Lane6嗽口水标本内引物扩增产物嗽口水标本内引物扩增产物Lane7培养物上清外引物扩增产物培养物上清外引物扩增产物Lane8培养物上清内引物扩增产物培养物上清内引物扩增产物20002000200020001000100010001000750750750750500500500500250250250250100100100100SARSSARSSARSSARS序列测定结果(序列测定结果(序列测定结果(序列测定结果(18186-1829418186-1829418186-1829418186-18294)三、三、SARS-COVSARS-COV细胞培养模型的建立和初步应用细胞培养模型的建立和初步应用VeroE6VeroE6VeroE6VeroE6正常细胞(正常细胞(正常细胞(正常细胞(a)a)a)a)与感染与感染与感染与感染SARS-SARS-SARS-SARS-CoVCoVCoVCoVGD322GD322GD322GD322株后病变细胞株后病变细胞株后病变细胞株后病变细胞(b)b)b)b)1.1.1.1.SARS-COVSARS-COV细胞培养模型细胞培养模型56205620minmin6030min6030min10010min10010min紫外线紫外线2020minmin杀灭病毒杀灭病毒杀灭病毒杀灭病毒2222物理因素对物理因素对物理因素对物理因素对SARSSARSSARSSARS病毒的影响病毒的影响病毒的影响病毒的影响室温室温2424hh3724h3724h病毒仍具感染性病毒仍具感染性472472hh重组人复合干扰素重组人复合干扰素重组人复合干扰素重组人复合干扰素对对对对VeroE6VeroE6VeroE6VeroE6的的的的细胞毒性细胞毒性细胞毒性细胞毒性浓度浓度浓度浓度各瓶细胞死亡率(各瓶细胞死亡率(各瓶细胞死亡率(各瓶细胞死亡率(1010-2-2)XXsPsP值值值值(u/mlu/ml)85.03.54.13.64.45.64.3785.03.54.13.64.45.64.370.830.830.050.0546.44.34.64.55.26.15.1846.44.34.64.55.26.15.180.890.890.050.0523.25.34.77.13.76.85.1323.25.34.77.13.76.85.131.581.580.050.0514.46.06.34.44.25.05.0414.46.06.34.44.25.05.040.870.870.050.050.53.55.86.45.24.33.84.830.53.55.86.45.24.33.84.8
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