流式细胞术的操作、原理与应用.pptx
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流式细胞术的操作、原理与应用.pptx
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主要内容主要内容一、流式细胞仪结构和原理一、流式细胞仪结构和原理流式细胞术简介流式细胞术简介流式细胞仪的光信号检测流式细胞仪的光信号检测流式细胞仪的结构组成流式细胞仪的结构组成荧光抗体的选择荧光抗体的选择流式细胞术数据的存贮、显示与分析流式细胞术数据的存贮、显示与分析二、流式细胞术操作与技巧二、流式细胞术操作与技巧三、流式细胞术在生物医学中的应用三、流式细胞术在生物医学中的应用1.11.1流式细胞术简介流式细胞术简介流式细胞术(流式细胞术(FlowCytometry,FCM)是以流式细胞仪为检测手段的一项能快速、精确的对单个细胞(或生物学颗粒)的理化特性进行多参数定量分析和分选的技术。
流式细胞仪(流式细胞仪(FlowCytometer)是集细胞与分子生物学、流体力学、激光技术、光电子技术、计算机技术、细胞荧光化学技术、单克隆抗体技术为一体的一种新型高科技仪器。
流式细胞术的特点流式细胞术的特点检测对象:
单细胞悬液或生物颗粒;检测对象:
单细胞悬液或生物颗粒;检测参数:
多参数;检测参数:
多参数;检测特点:
单细胞水平分析;检测特点:
单细胞水平分析;检测速度:
高速,最高达上万个细胞检测速度:
高速,最高达上万个细胞/秒;秒;检测结果:
精度高、准确性好;检测结果:
精度高、准确性好;可对目标细胞进行分选;可对目标细胞进行分选;流式细胞仪的分类流式细胞仪的分类分析型分析型流式细胞仪流式细胞仪细胞样本分析后最终进入废液桶,不能回收利用。
细胞样本分析后最终进入废液桶,不能回收利用。
分选型分选型流式细胞仪流式细胞仪既能流式分析,还能对分析的目的细胞进行分选;既能流式分析,还能对分析的目的细胞进行分选;进样管道较长,还需要保持无菌状态,所以分选型流式进样管道较长,还需要保持无菌状态,所以分选型流式细胞仪一般只用于分选。
细胞仪一般只用于分选。
流式细胞仪的发展及商品化流式细胞仪的发展及商品化1934Moldavanl:
Firsttry(固定式细胞分析固定式细胞分析-流动式流动式);1953Crosland-Taylor:
鞘流系统鞘流系统(解决难题解决难题);1956Coulter原理原理(血细胞计数器血细胞计数器);1965Kamentsky:
分光光度计定量细胞成分和散射光应用;分光光度计定量细胞成分和散射光应用;1967Kamentsky等设计了细胞分选的装置;等设计了细胞分选的装置;1969Vandilla等等:
第一台荧光检测细胞计第一台荧光检测细胞计(鞘流聚焦、激光鞘流聚焦、激光);1972斯坦福大学斯坦福大学:
研制出荧光激活细胞分选仪研制出荧光激活细胞分选仪(FACS);1973BD公司与斯坦福大学合作,研制生产第一台商用流公司与斯坦福大学合作,研制生产第一台商用流式细胞仪式细胞仪-FACS。
1975Kohler和和Milstein:
单克隆抗体技术单克隆抗体技术(促进流式发展促进流式发展)。
BDBD公司分析型流式细胞仪公司分析型流式细胞仪FACSCalibur双激光四色,市场覆盖率最高LSRII双激光六色,三激光八色,四激光十色,分析型最高配FACSCantoII双激光六色,三激光八色FACSVerse双激光六色,三激光八色BDBD公司分选型流式细胞仪公司分选型流式细胞仪FACSVantageSEFACSAriaIIIInflux1.21.2流式细胞术光信号检测流式细胞术光信号检测光信号的类型光信号的类型散射光信号散射光信号:
与标记荧光素无关,与标记荧光素无关,是细胞的固有参数。
是细胞的固有参数。
前向散射光前向散射光(forwardscatter,FSC);侧向散射光侧向散射光(sidescatter,SSC).荧光信号荧光信号自发荧光自发荧光(细胞色素因子、核黄素细胞色素因子、核黄素):
微弱:
微弱特异荧光:
标记的荧光素分子发出特异荧光:
标记的荧光素分子发出的荧光,比自发荧光强很多倍。
的荧光,比自发荧光强很多倍。
1.2.11.2.1散射光信号散射光信号
(一)前向散射光
(一)前向散射光FSCFSC信号方向与激光束平行,偏离度一般在信号方向与激光束平行,偏离度一般在1-6度范围内,度范围内,亦称小角度散射光,主要反映被测细胞的亦称小角度散射光,主要反映被测细胞的体积大小和活力体积大小和活力。
(二)侧向散射光
(二)侧向散射光SSCSSCSSC方向与激光束和液流形成的平面相垂直,亦称方向与激光束和液流形成的平面相垂直,亦称90度度散射光,其信号强度反映散射光,其信号强度反映细胞内部颗粒度和精细结构的变细胞内部颗粒度和精细结构的变化化。
(三)散射光的作用(三)散射光的作用实验中,常利用实验中,常利用FSC和和SSC这两种参数的组合,区分不同这两种参数的组合,区分不同的细胞群体,去除碎片、死细胞和粘连细胞的干扰。
的细胞群体,去除碎片、死细胞和粘连细胞的干扰。
粒细胞粒细胞单核细胞单核细胞淋巴细胞淋巴细胞红细胞、死细胞和碎片红细胞、死细胞和碎片死细胞死细胞或碎片或碎片粘连粘连细胞细胞肿瘤细胞株肿瘤细胞株FSC/SSC散点散点图图死细胞死细胞加药处理后加药处理后FSC/SSC散点散点图图通过通过FSC/SSC散点图,散点图,gate出目标细胞进行分析。
出目标细胞进行分析。
1.2.21.2.2荧光信号荧光信号
(一)荧光:
(一)荧光:
物质中的电子吸收光的能量由低能状态转变物质中的电子吸收光的能量由低能状态转变为高能状态,再回到低能状态时释放出的光。
为高能状态,再回到低能状态时释放出的光。
发射波长发射波长(荧光波长荧光波长)Emissionwavelength激发波长激发波长Excitationwavelength
(二)常用荧光素
(二)常用荧光素499nm蓝色荧光(蓝色荧光(Blue);500-549nm,绿色荧光,绿色荧光(Green);550-584nm,黄色荧光(,黄色荧光(Yellow);585-615nm,橙色荧光,橙色荧光(Orange);616-700nm,红色荧光(,红色荧光(Red);700nm,远红外荧光(,远红外荧光(Far-Red)。
标记抗体的荧光素标记抗体的荧光素荧光素分子荧光素分子激发光波长激发光波长(nm)发射光波长发射光波长(nm)中文名中文名FITC490520异硫氰酸荧光素异硫氰酸荧光素PE488575藻红蛋白藻红蛋白PerCP490675多甲藻叶绿素蛋白多甲藻叶绿素蛋白APC650660别藻青蛋白别藻青蛋白PE-Cy5496/546670藻红蛋白藻红蛋白-花青素花青素5PE-Cy7496/546767藻红蛋白藻红蛋白-花青素花青素7AlexaFlour488495519AlexaFlour647650665核酸荧光染料核酸荧光染料PI(碘化丙啶(碘化丙啶535,623)可选择性的插入核酸双螺旋碱基对中。
常可选择性的插入核酸双螺旋碱基对中。
常用于用于DNA分析,需要用分析,需要用RNase处理细胞排除处理细胞排除RNA对对DNA荧光定量的荧光定量的影响;影响;PI不能透过活细胞膜,常用于鉴定死细胞。
不能透过活细胞膜,常用于鉴定死细胞。
7-AAD(7-氨基放线菌素氨基放线菌素D545,647)以插入的方式与以插入的方式与DNA链的链的G-C碱基对结合,不能透过活细胞膜,常用于鉴定死细胞。
碱基对结合,不能透过活细胞膜,常用于鉴定死细胞。
DAPI(4,4,6-二脒基二苯基吲哚二脒基二苯基吲哚358,456)可以非嵌入方式与可以非嵌入方式与DNA链上的链上的A-T碱基对特异性结合。
变异系数明显小于其他染料,一种理碱基对特异性结合。
变异系数明显小于其他染料,一种理想的想的DNA定量染料。
定量染料。
Hoechst(343,450)常见为常见为Hoechst33342和和Hoechst33258,非,非嵌入的方式与嵌入的方式与DNA链上的链上的A-T碱基对结合。
能对活细胞染色,用于活碱基对结合。
能对活细胞染色,用于活细胞细胞DNA定量分析,如精子分选;还用于侧群细胞的分选。
定量分析,如精子分选;还用于侧群细胞的分选。
PY(派若宁(派若宁560,573)RNA染料,能进入活细胞。
染料,能进入活细胞。
AO(吖啶橙(吖啶橙509,525)DNA、RNA染料,染色后染料,染色后DNA呈黄绿色荧呈黄绿色荧光,光,RNA呈橙黄色荧光,可进行呈橙黄色荧光,可进行DNA/RNA双参数分析。
双参数分析。
1.31.3流式细胞仪的结构组成流式细胞仪的结构组成液流系统液流系统流动室流动室液流驱动系统液流驱动系统光学系统光学系统激发光源激发光源光束收集系统光束收集系统电子系统电子系统光电转换器光电转换器数据处理系统数据处理系统细胞分选系统细胞分选系统喷嘴喷嘴电偏转板电偏转板样本收集器样本收集器1.3.11.3.1液流系统液流系统鞘流技术:
根据层流原理发鞘流技术:
根据层流原理发展起来的技术,可以实现展起来的技术,可以实现两种液体的同轴流动,样两种液体的同轴流动,样本细胞流位于轴心稳定流本细胞流位于轴心稳定流动,外面包裹有鞘液动,外面包裹有鞘液(sheath)。
流体动力学聚焦:
稳定的液流体动力学聚焦:
稳定的液流从截面积较大的部分流流从截面积较大的部分流入截面积较小的部分后,入截面积较小的部分后,有一个聚焦收缩作用,细有一个聚焦收缩作用,细胞流直径被约束在胞流直径被约束在10-20um,避免了多个细胞重,避免了多个细胞重叠进入检测区。
叠进入检测区。
鞘液鞘液鞘液鞘液细胞流细胞流激光照射点激光照射点流体动力学聚焦示意图流体动力学聚焦示意图1.3.21.3.2光学系统光学系统
(一)
(一)激发光源激发光源:
激光器:
激光器气体激光器:
氩离子气体激光器:
氩离子(488nm、355nm)、氦氖、氦氖(633nm)、氪离子、氪离子(647nm)、氪氩、氪氩(568nm);染料激光器:
如氩离子激光泵浦的染料激光器:
如氩离子激光泵浦的Rhodomin6G水溶液染料激水溶液染料激光器,发出光器,发出550-650nm可变波可变波长激发光;长激发光;半导体激光器半导体激光器:
价格低、结构简单、寿命长。
价格低、结构简单、寿命长。
BD的的FACSCalibur已采用已采用635nm半导体激光器。
半导体激光器。
激光特点:
单波长、高能量、小发射角、高稳定性光照。
激光特点:
单波长、高能量、小发射角、高稳定性光照。
现在仪器常配有仪器选配现在仪器常配有仪器选配2-4根激光器,波长多为根激光器,波长多为488nm、633nm和和355nm、405nmUV;
(二)光收集系统
(二)光收集系统滤光片滤光片的组成的组成长通滤片长通滤片(LP):
只允许特定波长以上的光束通过;:
只允许特定波长以上的光束通过;短通滤片短通滤片(SP):
只允许特定波长以下的光束通过;:
只允许特定波长以下的光束通过;带通滤片带通滤片(BP):
只允许一定波长范围内的光束通过。
:
只允许一定波长范围内的光束通过。
LongpassShortpassBandpass460500540SP500SP500LP500LP500BP500/50BP500/50460500540460500540全反射光路全反射光路FACSAria流式细胞仪器信号检测系统流式细胞仪器信号检测系统PE-Cy7PerCP-Cy5.5PE-TexasRedPEFITCSSC1.3.31.3.3电子系统电子系统光电检测器光电检测器将光信号转换成电子信号。
将光信号转换成电子信号。
前置放大电路前置放大电路将信号等比例放大,输出电脉冲信号。
将信号等比例放大,输出电脉冲信号。
模数转换器模数转换器将模拟的电脉冲信号转换成数字信号。
将模拟的电脉冲信号转换成数字信号。
数据处理系统数据处理系统计算机系统数据采集、分析。
计算机系统数据采集、分析。
(一)
(一)光电检测器光电检测器(photodetector)(photodetector)光电二极管光电二极管(photodiode)光灵敏度低,测定强信号(光灵敏度低,测定强信号(FSC););光电倍增管光电倍增管(photomultiplier,PMT)光灵敏度高,测定弱信号(光灵敏度高,测定弱信号(SSC,FL1,FL2,FL3,FL4)。
PMT前向散射光前向散射光光电二极管光电二极管
(二)
(二)电信号两种放大方式电信号两种放大方式由于光信号比较弱,需将其等比例放大,方便计算机分析由于光信号比较弱,需将其等比例放大,方便计算机分析处理,一般信号的放大可以使用处理,一般信号的放大可以使用线性线性或或对数对数两种方式。
两种方式。
线性线性(linear;lin)对数对数(logarithmic;log)一般一般FSC和和SSC变异范围较小,故使用线性放大;荧光信变异范围较小,故使用线性放大;荧光信号变异范围较大,多使用对数放大。
号变异范围较大,多使用对数放大。
(三)(三)荧光信号的面积荧光信号的面积AA、宽度、宽度WW和高度和高度HH细胞通过激光检测区域时,产生的荧光信号被光电倍增管接收,形成脉冲信号。
荧光信号脉冲形成示意图荧光信号脉冲形成示意图TimeVoltsPulseAreaPulseHeightPulseWidth0荧光信号脉冲的面积、高度和宽度荧光信号脉冲的面积、高度和宽度Width=Area/Height一个信号脉冲有高度、面积和宽度。
光信号电信号数字光信号电信号数字信号信号通道通道(channel)一个光电检测器就是一个通道,有多少个光电二极管一个光电检测器就是一个通道,有多少个光电二极管/倍增管,就有多少个通道:
倍增管,就有多少个通道:
散射光通道散射光通道:
FSC通道和通道和SSC通道;通道;荧光通道荧光通道通道命名方式:
通道命名方式:
以以FL(fluorescence)加数字命名,如加数字命名,如FL1、FL2、FL3等。
等。
以该通道接收的主要荧光素命名,如以该通道接收的主要荧光素命名,如FITC通道、通道、PE通通道、道、APC通道等。
通道等。
Forexample:
FACSCalibur有有488nm和和633nm两根激两根激光器,光器,488nm能检测能检测FSC、SSC、FL1(FITC)、FL2(PE)、FL3(PerCP),635能检测能检测FL4(APC),代表,代表Calibur有有6个个通道,最多能同时检测通道,最多能同时检测4个荧光,个荧光,6种参数。
种参数。
1.3.41.3.4流式分选流式分选电荷式电荷式分选分选超声振动器超声振动器(15-100kHz)液流充电系统液流充电系统高压偏转板高压偏转板收集装置收集装置(流式管、培养板流式管、培养板)lasers断裂点断裂点(充电充电)高压偏转板高压偏转板四路分选原理四路分选原理电荷式分选装置电荷式分选装置分选指标分选指标分选时间由三方面决定:
进样速度、目标细胞所占比例、分选时间由三方面决定:
进样速度、目标细胞所占比例、需要收集的细胞数。
需要收集的细胞数。
需要细胞数目标细胞所占比例(%)15501041.7min20s2s10516.8min3.4min20s1062.8h3.4min3.4min1071.2天5.6h34min分选时间表分选时间表(机器流速机器流速10000个个/s时时)分选速度、分选纯度和分选收获率,相互影响。
分选速度、分选纯度和分选收获率,相互影响。
分选纯度分选纯度指被分选出来的细胞所占的百分比,一般能达指被分选出来的细胞所占的百分比,一般能达99%以上。
以上。
分选收获率分选收获率是指被分选出的细胞与原来总细胞的百分比。
是指被分选出的细胞与原来总细胞的百分比。
分选纯度和收获率永远是相互矛盾的,纯度提高,收获率分选纯度和收获率永远是相互矛盾的,纯度提高,收获率降低,反之亦然。
降低,反之亦然。
富集模式富集模式(enrichmode)纯化模式纯化模式(purifymode)单细胞模式单细胞模式(singlecellmode)1.41.4荧光抗体的选择荧光抗体的选择A根据流式细胞仪选择抗体根据流式细胞仪选择抗体流式细胞仪能检测的通道数流式细胞仪能检测的通道数(由激光器种类、数量和使用由激光器种类、数量和使用的光学滤片决定的光学滤片决定)。
如。
如FACSCalibur:
多色标记荧光素搭配原则:
每个通道只能选择一种荧光素;多色标记荧光素搭配原则:
每个通道只能选择一种荧光素;各个通道之间的荧光素可以随意搭配。
各个通道之间的荧光素可以随意搭配。
FACSCalibur常用四色搭配:
常用四色搭配:
FITC、PE、PerCP、APC。
488FL1BP530/30515-545FITC、AF488FL2BP585/42564-606PEFL3670LP670PE-Cy5、PerCP、PE-Cy7635FL4BP661/16653-669APC、AF647B根据抗原表达强弱合理选根据抗原表达强弱合理选择抗体择抗体不同的荧光素强度有所不同;不同的荧光素强度有所不同;高表达的抗原可用不太高表达的抗原可用不太“亮亮”的染料,更的染料,更“亮亮”的荧光素分的荧光素分配给表达低的抗原:
配给表达低的抗原:
CD4-FITC、CD25-APC、Foxp3-PEC选择荧光波谱间光谱重叠较小的荧光染料进行组合,选择荧光波谱间光谱重叠较小的荧光染料进行组合,同时需要正确的调节补偿。
同时需要正确的调节补偿。
CD51.5FCM1.5FCM数据存储、显示与分析数据存储、显示与分析标准的标准的FCM数据采用数据采用列表模式(列表模式(listmode),记录了每,记录了每个细胞的所有参数的信息。
个细胞的所有参数的信息。
每个细胞检测每个细胞检测5个参数,那么获取个参数,那么获取10000个细胞,容量为个细胞,容量为510000(字或双字)。
(字或双字)。
Event#FSCSSCFL1FITCFL2PEFL3APC110050010650421105057007006390480720670104954901572015FCMFCM数据显示方式数据显示方式单参数直方图单参数直方图(Histogram)双参数数据显示:
双参数数据显示:
散点图散点图(DotPlot)伪彩图伪彩图(Pseudo-colorPlot)等高线图等高线图(ContourPlot)密度图密度图(DensityPlot)假三维图假三维图(Pseudo3DPlot)三维图三维图(3DPlot)常用分析软件常用分析软件CellQuestDivaFlowJOWinMDIFCSExpress直方图直方图HistogramHistogram细胞的某一单参数数据的统计分布图,横坐标表示荧光信细胞的某一单参数数据的统计分布图,横坐标表示荧光信号或散射光信号相对强度的值,单位是道数,纵坐标一般号或散射光信号相对强度的值,单位是道数,纵坐标一般是细胞数。
是细胞数。
Event#FL1FITC110270037204150101001000CountsFITC荧荧光强度光强度横坐标既可以是线性的,也可以是对数的。
横坐标既可以是线性的,也可以是对数的。
DNA倍体分析倍体分析抗原表达分析抗原表达分析Overlay图图散点图散点图散点图中每个点代表一个细胞,散点图中每个点代表一个细胞,X轴与轴与Y轴分别代表一种轴分别代表一种参数,优点是比直方图直观。
参数,优点是比直方图直观。
FL1FL2散点图和伪彩图散点图和伪彩图等高图和密度图等高图和密度图等高图:
类似于地图中的等高线,同一条线上的细胞数目等高图:
类似于地图中的等高线,同一条线上的细胞数目相等,越在里面的曲线代表细胞数目越多。
相等,越在里面的曲线代表细胞数目越多。
密度图:
点密度越大的地方细胞越多,点密度越小的地方密度图:
点密度越大的地方细胞越多,点密度越小的地方细胞少。
细胞少。
假三维图和三维图假三维图和三维图SSC-HeightFSC-HeightCountsSSCCD45CD14设门与数据分析设门与数据分析门门(Gate(Gate,简写,简写G)G)是流式细胞术中的一个重要术语,是流式细胞术中的一个重要术语,FCMFCM数据分析过程实际上就是选门和设门的过程。
数据分析过程实际上就是选门和设门的过程。
椭圆形椭圆形圆形圆形矩形矩形任意形状任意形状R(RegionR(Region,区域,区域)。
门可以是单一区域。
门可以是单一区域(G=R1)(G=R1),也可以是几个区,也可以是几个区域组合在一起:
域组合在一起:
G=R1andR2;G=R1orR2;G=R1notR2G=R1andR2;G=R1orR2;G=R1notR2。
十字门十字门线性门线性门二、流式细胞术操作与技巧二、流式细胞术操作与技巧流式流式细胞胞术操作流程操作流程:
培养细胞血液骨髓新鲜组织石蜡包埋单细胞悬液制备荧光染色上机检测表型测定细胞分选继续培养FISHPCR统计学分析2.1单细胞悬液制备单细胞悬液制备2.2免疫荧光标记免疫荧光标记2.3对照的设置对照的设置2.4光谱重叠与补偿光谱重叠与补偿2.12.1单细胞悬液制备单细胞悬液制备2.1.1新鲜实体组织的样本制备新鲜实体组织的样本制备对于不同组织来源的实体组织和实体瘤标本,应该根对于不同组织来源的实体组织和实体瘤标本,应该根据各自特点选择不同的分散细胞方法,以期达到单细胞据各自特点选择不同的分散细胞方法,以期达到单细胞产产量高量高、损伤小损伤小的目的。
常用方法有:
的目的。
常用方法有:
酶消化法酶消化法机械法机械法化学试剂处理法化学试剂处理法酶消化法酶消化法:
根据分散组织类型来确定使用的酶类:
根据分散组织类型来确定使用的酶类:
胰蛋白酶胰蛋白酶水解酯键、肽键;水解酯键、肽键;胶原酶胶原酶降解几种分子类型的胶原;降解几种分子类型的胶原;溶菌酶溶菌酶水解糖蛋白、肽的糖苷键;水解糖蛋白、肽的糖苷键;弹性蛋白酶弹性蛋白酶消化糖蛋白、弹性蛋白的纤维。
消化糖蛋白、弹性蛋白的纤维。
1.1.将新鲜组织置于离心管中,加入将新鲜组织置于离心管中,加入1-2ml酶消化酶消化20-30min(恒温(恒温37或室温),间断振荡或吹打;或室温),间断振荡或吹打;2.2.终止消化,收集细胞悬液,终止消化,收集细胞悬液,300目尼龙网过滤,除去目尼龙网过滤,除去细胞团块,低速离心除去细胞碎片;细胞团块,低速离心除去细胞碎片;3.3.将制备好的单细胞悬液进行荧光标记或保存备用。
将制备好的单细胞悬液进行荧光标记或保存备用。
注意注意:
酶的使用浓度、温度、消化时间、酶活性的酶的使用浓度、温度、消化时间、酶活性的pH值。
值。
机械法特点机械法特点:
易造成细胞碎片和团块,实际操作时,应注意碎:
易造成细胞碎片和团块,实际操作时,应注意碎片和团块的去除,常与其他方法(如酶消化法)配合使用片和团块的去除,常与其他方法(如酶消化法)配合使用。
组织解离器机械法机械法:
有有剪碎法剪碎法、网搓法网搓法、研研磨法磨法等。
等。
利用机械方法、物理方利用机械方法、物理方法给予组织交大的压力,法给予组织交大的压力,使细胞从组织间分散开使细胞从组织间分散开来。
来。
化学处理法化学处理法:
作用原理:
将组织细胞间起黏着作用的钙、镁离子置作用原理:
将组织细胞间起黏着作用的钙、镁离子置换出来,从而使细胞分散开来,常用试剂有换出来,从而使细胞分散开来,常用试剂有EDTA、EGTA、TPB等。
等。
EDTA是一种螯合剂,可以和组织间的钙、镁离子形是一种螯合剂,可以和组织间的钙、镁离子形成螯合物,实际运用中常采用螯合物加酶法(主要是胰蛋成螯合物,实际运用中常采用螯合物加酶法(主要是胰蛋白酶)。
白酶)。
特点特点:
用化学法细胞存活率低、细胞产额低,细胞碎片:
用化学法细胞存活率低、细胞产额低,细胞碎片和聚集量不稳定。
和聚集量不稳定。
机械法往往造成严重的细胞损伤,而结果却是较低的细胞机械法往往造成严重的细胞损伤,而结果却是较低的细胞产量,注意去除细胞碎片和团块以免影响产量,注意去除细胞碎片和团块以免影响FCM结果,如结果,如低速离心去碎片、尼龙网过滤团块等。
低速离心去碎片、尼龙网过滤团块等。
酶消化法、化学试剂处理法对实
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- 细胞 操作 原理 应用